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凋亡檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

來(lái)源:上海研謹(jǐn)生物科技有限公司   2020年11月20日 19:45  

 

Annexin V-Alexa Fluor 488/PI 凋亡檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

 

Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit 

 

目錄號(hào):K2576     

保存:2-8  ℃避光保存 

 

組分說(shuō)明

 

Cat.No.                      K2576

KitSize                        50

4×BindingBuffer                10ml

PropidiumIodide,PI             500 μl

AnnexinV-AlexaFluor488         250 μl

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介 

 

   AnnexinV-AlexaFluor488/PI 凋亡檢測(cè)試劑盒是一種采用                AnnexinV-AlexaFluor488 與PI 雙染法進(jìn)行細(xì)胞早期凋亡分析的檢測(cè)試劑盒。

   細(xì)胞凋亡早期改變發(fā)生在細(xì)胞膜表面,這些細(xì)胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細(xì)胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外,使PS暴露在細(xì)胞膜外表面。PS 是一種帶負(fù)電荷的磷脂,正常主要存在于細(xì)胞膜的內(nèi)面,在細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)細(xì)胞膜上的這種磷脂分布的不對(duì)稱性被破壞而使 PS 暴露在細(xì)胞膜外。AnnexinV 具有易于結(jié)合到磷脂類如 PS 的特性,對(duì) PS 有高度的親和性。因此,該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測(cè)暴露在細(xì)胞膜表面的 PS。PS 轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外不是凋亡所*的,也可發(fā)生在細(xì)胞壞死中。兩種細(xì)胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細(xì)胞膜是完好的,而細(xì)胞壞死在其早期階段細(xì)胞膜的完整性就被破壞。另外一種活細(xì)胞非透過(guò)性熒光染料碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)不能通過(guò)完整的活細(xì)胞,但能夠?qū)乃篮偷蛲鐾砥诘募?xì)胞進(jìn)行染色,因此通常將AnnexinV 與  PI 配合染色,以區(qū)別凋亡早期細(xì)胞與壞死細(xì)胞和凋亡的晚期細(xì)胞。

 

注意事項(xiàng) 

 

1.  消化細(xì)胞時(shí)不能用含EDTA 的胰酶。 

2.  本試劑盒需使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

3.  需自備PBS 和去離子水。

4.  熒光染料均存在淬滅問(wèn)題,保存和使用過(guò)程中請(qǐng)盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。

5.  PI 對(duì)人體有刺激性,請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。

6.  請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

 

操作步驟 

 

1. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:

 

    a. 對(duì)于貼壁細(xì)胞:小心收集細(xì)胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用胰酶消化細(xì)胞,至細(xì)胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來(lái)時(shí),加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下所有的貼壁細(xì)胞,并輕輕吹散細(xì)胞。再次收集到離心管內(nèi)。1000×g 左右離心3-5 分鐘,沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞,如果細(xì)胞沉淀不充分,可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50μl 左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細(xì)胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,再次離心沉淀細(xì)胞,小心吸除上清。再次加入1ml4℃預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,再次離心沉淀細(xì)胞。

    b. 對(duì)于懸浮細(xì)胞:1000×g 左右離心3-5 分鐘,沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞,如果細(xì)胞沉淀不充分,可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約                            50 微升左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細(xì)胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,并轉(zhuǎn)移到1.5 毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞,小心吸除上清,可以殘留約                                50μl 左右的   PBS,以避免吸走細(xì)胞。再次加入1ml4℃預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,再次離心沉淀細(xì)胞。

2. 用去離子水按 1:4 稀釋BindingBuffer(4mlBindingBuffer+12ml 去離子水);

3. 用 250μlBindingBuffer 重新懸浮細(xì)胞,調(diào)節(jié)其濃度為 1×106/ml;

4. 取100μl 的細(xì)胞懸液于 5ml 流式管中,加入5μlAnnexinV-AlexaFluor488 和             10 μl20μg/ml 的 PI 溶液;

5. 混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘;

6. 在反應(yīng)管中加 400μlPBS,流式細(xì)胞儀(FACS)分析。



 



 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

CCK8檢測(cè)

HE染色

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化IHC染色

熒光定量PCR

動(dòng)物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測(cè)

免疫熒光染色

激光共聚焦

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

石蠟/冰凍切片

透射電鏡服務(wù)

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

蛋白雙向(2-D)

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

免疫共沉淀

原位雜交(FIsh)

蛋白質(zhì)純化

分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

組蛋白甲基化磷酸化乙?;?/a>

 

蛋白雙向2D-WB

 

藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

 

番紅O固綠染色

明膠酶譜MMP

酶活性檢測(cè)

動(dòng)物造模/模型實(shí)驗(yàn)服務(wù)

 

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