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VIRA-PORE COVID類似病毒空氣采樣技術(shù)驗(yàn)證摘要

來源:上海睿玥實(shí)驗(yàn)器材有限公司   2020年11月23日 11:25  

VIRA-PORE空氣病毒采樣盒

空氣采樣盒,用于收集病毒顆粒

具有ZePore™過濾器的Vira-Pore病毒采樣盒經(jīng)過專門設(shè)計(jì)和驗(yàn)證,可用于收集空氣傳播中的冠狀病毒,并且它可用于采樣其他類似的病毒。

目標(biāo)

為了確定冠狀病毒空氣采樣的合適參數(shù),本驗(yàn)證采用直徑37mm孔徑1 µmPTFE層壓ZePore空氣病毒過濾器對(duì)冠狀病毒的替代物--人類冠狀病毒OC43HCoV OC43)進(jìn)行空氣采樣。 人冠狀病毒OC43和COVID病毒均為正向單鏈RNA+ ssRNAβ包裹的冠狀病毒,因此OC43是合適的COVID病毒模擬物。 通常以往在過濾器上進(jìn)行病毒采樣的研究沒有包括基本的驗(yàn)證數(shù)據(jù),例如確定從過濾器上洗脫病毒的合適技術(shù),在采樣過程中或在運(yùn)輸及存儲(chǔ)過程中病毒在過濾器上的穩(wěn)定性等數(shù)據(jù)。

 

方法

標(biāo)準(zhǔn)化病毒空氣采樣的持續(xù)時(shí)間,提取洗脫的病毒RNA,然后用超微量核酸蛋白分析儀進(jìn)行RNA定量(ng / µL為單位),采用熒光定量PCR儀對(duì)現(xiàn)場樣品進(jìn)行測試,所有實(shí)驗(yàn)均重復(fù)三次(除非另有說明)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用病毒相對(duì)回收質(zhì)量(relative recovery)來表示。病毒相對(duì)回收質(zhì)量(RRmass)是從過濾器洗脫的病毒質(zhì)量濃度(ng / ml)相對(duì)于初始霧化器懸浮液中病毒質(zhì)量濃度(ng / ml)的比率。過濾器安裝在開口式37mm三層導(dǎo)電聚丙烯盒中。導(dǎo)電盒優(yōu)選用于空氣微粒采樣,以防止靜電吸附到盒壁。空氣流量初步設(shè)置為10 L / min,方便在短時(shí)間內(nèi)較大程度地收集病毒。帶有過濾器和支撐墊的壓降為17英寸水壓,與某些個(gè)人采樣泵(例如Gilian 12GSA SG10SG10-2)兼容??諝鈽悠芬?span style="font-family:helvetica">10 L / min的流量進(jìn)行病毒顆??諝獠蓸?span style="font-family:helvetica neue">10分鐘,同時(shí)另一個(gè)樣品采用對(duì)過濾器加標(biāo)病毒顆粒懸浮液,兩個(gè)樣品均使用兩種不同的方法對(duì)病毒RNA進(jìn)行洗脫。兩種情況下回收率均較高的洗脫方法都是將濾膜向內(nèi)卷起來,然后將其放入裝有1 mL MTM培養(yǎng)基(Longhorn Vaccines and Diagnostics™Inc。)的2 mL微量離心管中,并渦旋三次,每次渦旋10秒。霧化病毒懸浮液是使用Collison霧化器在II級(jí)生物安全柜中產(chǎn)生的。此過程產(chǎn)生的平均空氣傳播顆粒濃度為~1 x 10^8/ L。進(jìn)行空氣采樣,采樣10分鐘,60分鐘后,立即將濾膜中的病毒洗脫下來, 或采樣10分鐘將其暴露在清潔的氣流中60分鐘再洗脫病毒。 

結(jié)果

對(duì)于采樣10分鐘的樣品,RNA質(zhì)量濃度和RRmass(圖1中的紫色條)分別為2.0 x 10^6 ng / mL±1.06 x 10^6)和0.55±0.18)。對(duì)于采樣60分鐘的樣品,平均RNA質(zhì)量濃度為5.98 x 10^6 ng / mL±1.79 x 10^6),調(diào)整采樣時(shí)間后的RRmass(圖1中的藍(lán)色條)為0.32±0.10)。在采樣10分鐘的樣品中,然后將其暴露在清潔的氣流中60分鐘,RNA質(zhì)量濃度和RRmass(圖1中的橙色條)分別為2.17 x 10^6 ng / mL±6.97 x 105)和0.50±0.16)。這些結(jié)果表明,在分別采樣10分鐘,60分鐘和10分鐘,然后暴露于清潔氣流60分鐘后,霧化病毒的回收率是相似的,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p = 0.31)。在另一個(gè)實(shí)驗(yàn)中,空氣樣本分別在4°C25°C下存儲(chǔ)7天。在4°C下,RNA質(zhì)量濃度為4.41 x 106 ng / mL±2.51 x 10^6),在25°C下存儲(chǔ)時(shí)為1.34 x 10^6 ng / mL±8.23 x 105)。因此,房間存放條件下的平均濃度比冰箱存放條件下的平均濃度低3.3倍。由于實(shí)驗(yàn)的可變性,差異沒有顯著差異(p = 0.11)。如圖1所示,4°C存儲(chǔ)(綠色條)和25°C存儲(chǔ)(黃色條)的RRmass分別為0.55±0.31)和0.17±0.10)。通過qRT-PCR進(jìn)一步分析了上述每組實(shí)驗(yàn)中的一個(gè)洗脫樣品,以顯示總RNA分析方法未產(chǎn)生誤導(dǎo)性結(jié)果。 對(duì)于這兩個(gè)樣品,檢測到的RNA濃度相似:每毫升4.01 x 10^6 RNA拷貝(用于4°C儲(chǔ)存)和每毫升4.18 x 10^6 RNA拷貝(用于25°C儲(chǔ)存)。對(duì)于這兩個(gè)樣品,qRT-PCRCT值均高于30,是接近檢測下限的Ct值。 這可以解釋兩個(gè)微量樣品之間值的相似性,以及為什么與總RNA分析不同,兩個(gè)樣品之間的差異不明顯。 在進(jìn)行進(jìn)一步工作之前,建議在分析之前將樣品冷藏保存。

 

結(jié)論

•COVID病毒的替代物人類冠狀病毒OC43HCoV OC43)被成功霧化,收集并回收用于分析。

與搖床方法相比,渦旋洗脫產(chǎn)生更高的RNA濃度。

在三種不同的采樣場景(10分鐘,60分鐘和10分鐘后暴露于60分鐘的清潔氣流)后,從過濾器中回收霧化病毒的差異沒有顯著差異。

比較在4°C25°C儲(chǔ)存后病毒的回收率,與在25°C儲(chǔ)存后相比,病毒在4°C儲(chǔ)存后的回收率高約3倍; 但是,由于實(shí)驗(yàn)的可變性,差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

 

注意:VIRA-PORE病毒采樣盒已經(jīng)過測試可從COVID替代病毒中回收RNA病毒,但尚未測試過從COVID病毒中收集RNA病毒。 請(qǐng)參閱技術(shù)摘要說明的測試方法和測試結(jié)果。 客戶應(yīng)自己負(fù)責(zé)遵守(i)產(chǎn)品使用說明和(ii)收集空氣傳播的病毒后,與產(chǎn)品的使用和安全處理以及包裝,標(biāo)簽和運(yùn)輸有關(guān)的所有適用的政府法律,規(guī)則,法規(guī)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。生產(chǎn)商建議您在進(jìn)行任何空氣采樣之前,先向具有病毒專業(yè)知識(shí)的合格環(huán)境微生物實(shí)驗(yàn)室尋求指導(dǎo)。 尋求指導(dǎo),安全的處理和運(yùn)輸程序,因?yàn)镃OVID病毒是高度傳染性的病原體,如果暴露則具有重大健康隱患。

免責(zé)聲明

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