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H2S含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

來(lái)源:上海研謹(jǐn)生物科技有限公司   2020年12月08日 09:51  

H2S含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)              微量

 

注意:正式測(cè)定之前選擇預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)

規(guī)格: 100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容:

提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 10mL×1  瓶,4℃保存。

試劑:液體 5mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑:液體 5mL×1 瓶,4℃保存。

試劑:液體 1mL×1 管,4℃避光保存。

標(biāo)準(zhǔn)品粉劑 3mg×1 管,4℃避光保存

產(chǎn)品說(shuō)明:

 

 

H2S 是一種新型氣態(tài)信號(hào)分子,存在于腦內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì),生理濃度的 H2S 對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)海馬的長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)功能具有重要的調(diào)節(jié)作用,并對(duì)自發(fā)性高血壓、出血性休克及肝硬化等疾病的過(guò)程發(fā)揮著重要的病理生理效應(yīng)。

H2S 與醋酸鋅、N, N-二甲基對(duì)苯二胺和硫酸鐵銨等反應(yīng)生成亞甲基藍(lán),亞甲基藍(lán)在 665nm 有D吸收峰,通過(guò)測(cè)定其吸光值可計(jì)算 H2S 含量。

需自備的儀器和用品:

天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀、微量比色皿96孔板、蒸餾水。

操作步驟:

一、樣品處理:

a. 組織:按照組織質(zhì)量g:提取液體積(mL)15~10  的比例建議稱取約 0.1g  組織,加入 1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后 10000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

b. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量10 4 個(gè):提取液體積mL500~10001 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL  提取液,冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3  秒,間隔 7 秒,總時(shí)間 3min;然后 10000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測(cè)。

c. 血清(漿:直接測(cè)定。

、測(cè)定步驟: (取 1.5ml 離心管,按照下表操作)

 

空白管

測(cè)定管

標(biāo)準(zhǔn)管

樣品(μL)

 

50

50

蒸餾水(μL)

50

 

 

d. 臨用前將標(biāo)準(zhǔn)品加入1ml試劑一充分溶解則為12.5μmol /mL H2S標(biāo)準(zhǔn)品溶液,稀釋100倍后為0.125μmol /mL標(biāo)準(zhǔn)品溶液

 

 

試劑一(μL)

50

50

50

充分震蕩混勻

 

試劑二(μL)

50

50

50

充分震蕩混勻

試劑三(μL)

50

50

50

充分震蕩混勻

試劑四(μL)

10

10

10

12000rpm,4℃,離心 10min,取200μl上清混勻,25℃靜置20min,于比色皿中,測(cè)定665nm吸光值,記為A空白、A測(cè)定、A標(biāo)準(zhǔn)。

三、H2S 含量計(jì)算公式:

  • 按蛋白濃度計(jì)算

H2S含量(μmol /mg prot=0.125×(A測(cè)定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白) ÷Cpr

  • 按樣本質(zhì)量計(jì)算

H2S含量(μmol /g)=0.125×(A測(cè)定-A空白)÷(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白) ÷W

  • 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

H2S含量(μmol /104 cell)=0.125×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管) ÷細(xì)胞數(shù)量

  • 按照液體體積計(jì)算

H2S含量(μmol /mL)=0.125×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)

 

 

注意事項(xiàng):如樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品OD,可稀釋樣本或增大標(biāo)準(zhǔn)品濃度

 

 

細(xì)胞劃痕http://www.muquzhou.cn/st166210/product_2889093.html

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)http://www.muquzhou.cn/st166210/product_2720588.html

定點(diǎn)突變http://www.muquzhou.cn/st166210/product_2888343.html

免疫共沉淀http://www.muquzhou.cn/st166210/product_33617809.html

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