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H2S含量測定試劑盒說明書

來源:上海研謹生物科技有限公司   2020年12月08日 09:51  

H2S含量測定試劑盒說明書              微量

 

注意:正式測定之前選擇預期差異大的樣本做預實驗

規(guī)格: 100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容:

提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:液體 10mL×1  瓶,4℃保存。

試劑:液體 5mL×1 瓶,4℃避光保存。

試劑:液體 5mL×1 瓶,4℃保存。

試劑:液體 1mL×1 管,4℃避光保存。

標準品粉劑 3mg×1 管,4℃避光保存

產(chǎn)品說明:

 

 

H2S 是一種新型氣態(tài)信號分子,存在于腦內(nèi)的神經(jīng)遞質(zhì),生理濃度的 H2S 對神經(jīng)系統(tǒng)海馬的長時程增強功能具有重要的調(diào)節(jié)作用,并對自發(fā)性高血壓、出血性休克及肝硬化等疾病的過程發(fā)揮著重要的病理生理效應。

H2S 與醋酸鋅、N, N-二甲基對苯二胺和硫酸鐵銨等反應生成亞甲基藍,亞甲基藍在 665nm 有D吸收峰,通過測定其吸光值可計算 H2S 含量。

需自備的儀器和用品:

天平、低溫離心機、可見分光光度計或酶標儀、微量比色皿96孔板、蒸餾水。

操作步驟:

一、樣品處理:

a. 組織:按照組織質(zhì)量g:提取液體積(mL)15~10  的比例建議稱取約 0.1g  組織,加入 1mL提取液)進行冰浴勻漿,然后 10000g,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

b. 細菌、真菌:按照細胞數(shù)量10 4 :提取液體積mL500~10001 的比例(建議 500 細胞加入 1mL  提取液,冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,超聲 3  秒,間隔 7 秒,總時間 3min;然后 10000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測。

c. 血清(漿:直接測定。

、測定步驟: (取 1.5ml 離心管,按照下表操作)

 

空白管

測定管

標準管

樣品(μL)

 

50

50

蒸餾水(μL)

50

 

 

d. 臨用前將標準品加入1ml試劑一充分溶解則為12.5μmol /mL H2S標準品溶液,稀釋100倍后為0.125μmol /mL標準品溶液

 

 

試劑一(μL)

50

50

50

充分震蕩混勻

 

試劑二(μL)

50

50

50

充分震蕩混勻

試劑三(μL)

50

50

50

充分震蕩混勻

試劑四(μL)

10

10

10

12000rpm,4℃,離心 10min,取200μl上清混勻,25℃靜置20min,于比色皿中,測定665nm吸光值,記為A空白、A測定、A標準。

三、H2S 含量計算公式:

  • 按蛋白濃度計算

H2S含量(μmol /mg prot=0.125×(A測定-A空白)÷(A標準-A空白) ÷Cpr

  • 按樣本質(zhì)量計算

H2S含量(μmol /g)=0.125×(A測定-A空白)÷(A標準-A空白) ÷W

  • 按細胞數(shù)量計算

H2S含量(μmol /104 cell)=0.125×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管) ÷細胞數(shù)量

  • 按照液體體積計算

H2S含量(μmol /mL)=0.125×(A測定管-A空白管)÷(A標準管-A空白管)

 

 

注意事項:如樣本OD值大于標準品OD,可稀釋樣本或增大標準品濃度

 

 

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動物實驗http://www.muquzhou.cn/st166210/product_2720588.html

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