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AlphaLISA表觀遺傳學(xué)試劑選購

來源:北京吉泰遠成科技有限公司   2020年12月17日 12:39  

AlphaLISA表觀遺傳學(xué)試劑是由Alpha技術(shù)所延伸出來的便利產(chǎn)品,可適用于偵測PeptideFull-length型式的Histone蛋白。具有高度專一性,可藉由偵測各種后轉(zhuǎn)譯修飾類型的Histone蛋白,定量組蛋白密碼(histone code)調(diào)控者(例如Acetyltransferase, Methyltransferase, Deacetylase, Demethylase)的酵素活性。與ELISA產(chǎn)品相比,AlphaLISA偵測試劑具有更加寬廣的偵測區(qū)間,可減少樣品稀釋比例的測試步驟;并且具有更精簡快速的實驗流程,讓研究者能夠更快取得定量結(jié)果。

AlphaLISA表觀遺傳學(xué)試劑作用原理:

AlphaLISA 偵測技術(shù)是由兩種核心物質(zhì)所組成,一為Donor bead,另一為Acceptor bead。Donor bead 本身身帶有光敏感物質(zhì)"Phthalocyanine",因此當(dāng)以680 nm 雷射光激發(fā)Donor bead 時,此光敏感物質(zhì)可催化周遭的氧分子形成活化態(tài),并于作用范圍內(nèi)激發(fā)鄰近的Acceptor bead 產(chǎn)生化學(xué)冷光反應(yīng),此冷光能量會進一步轉(zhuǎn)移至Acceptor bead 本身所帶有的螢光物質(zhì),使其終產(chǎn)生615 nm 螢光訊號。與其他偵測平臺相比(例如FRET、TR-FRET),AlphaLISA 技術(shù)的能量轉(zhuǎn)移有效距離長達200 nm,因此不論是勝肽、重組蛋白、或是細胞內(nèi)原始含有的蛋白質(zhì),皆可作為實驗偵測對象。具有專一性佳、靈敏度高、偵測區(qū)間廣泛以及流程簡單等多項優(yōu)質(zhì)特點。

在進行實驗時,研究者僅需自行準(zhǔn)備(1). 待測酵素與輔因子(cofactor)、(2). 鍵結(jié)有Biotin Histone peptide substrate (Histone 全長蛋白),即可開始進行實驗。此兩項所需試劑在產(chǎn)品應(yīng)用文件中皆有詳盡的建議資訊,因此研究者可安心參照選購。

AlphaLISA anti-histone H3 K9me2 antibody Acceptor beads的專一性測試結(jié)果證實此試劑的確能夠?qū)R恍缘乇孀R偵測H3K9me2 biotinylated peptide,并且無論是H3K9me1 peptides、H3K9me3 peptides、methylated H3K4 peptidesunmodified H3 peptides,皆無法干擾反應(yīng)產(chǎn)生偽陽性結(jié)果。

所有Alpha系列的Histone modification偵測試劑,皆實際使用特定酵素進行完整測試,具有詳盡的測試條件與實驗流程可供參照。使用G9a Histone H3-Lysine N-methyltransferase所進行的酵素用量和時間反應(yīng)測試結(jié)果,受測產(chǎn)品為Anti-methyl-Histone H3 Lysine 9 (H3K9me2) AlphaLISA® Acceptor Beads (需同時搭配Alpha Streptavidin Donor beads等產(chǎn)品使用)。其他測試項目包含:Cofactor titration (ex, SAM)、Enzyme inhibition、Z'-factor determination.

Methyl ModificationsAcetyl Modifications
Mark DetectedAlphaLISA anti-mark Acceptor BeadsMark DetectedAlphaLISA anti-mark Acceptor Beads
Assay PointsCat. No.Assay PointsCat. No.
H3K4 Unmodified500AL119CH3K4 Unmodified500AL119C
10,000AL119M10,000AL119M
50,000AL119R50,000AL119R
H3K4me1-2500AL116CH3K9ac500AL114C
10,000AL116M10,000AL114M
50,000AL116R50,000AL114R
H3K9me2500AL117CH3K27ac500AL120C
10,000AL117M10,000AL120M
50,000AL117R50,000AL120R
H3K27me2-1500AL121Cp53 K382ac500AL124C
10,000AL121M10,000AL124M
50,000AL121R50,000AL124R
H3K27me3500AL122C備注:(1). 每個Assay Point 是指使用384-well 多孔盤,每個well 內(nèi)含有25 µl 反應(yīng)體積為計算。(2). AlphaLISA 系列產(chǎn)品皆屬于偵測試劑,并無提供enzyme 與substrate,若為原廠測試過品項,可提供您相關(guān)材料來源作為參考。
10,000AL122M
50,000AL122R
H3K36me2500AL123C
10,000AL123M
50,000AL123R
Additional Items Required for AlphaLISA histone modification assays
ProductAssay PointsCat. No.
AlphaScreen Streptavidin Donor beads2,0006760002S
10,0006760002
100,0006760002B
AlphaLISA biotin-anti-histone H3 (C-ter) antibody500AL118C
(required for full-length Histone substrates)10,000AL118M
 50,000AL118R
AlphaLISA 5X Epigenetics Buffer 1 kit10 mlAL008C
(required for Histone H3-derived peptidic substrates)100 mlAL008F

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