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細(xì)胞篩選方法和步驟

來源:上海雅吉生物科技有限公司   2021年06月21日 09:45  

篩選步驟:

       a.殺滅曲線的確定
       1.將未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞按每孔0.05million鋪入24孔板,孵育過夜,
       2.第二天,除去24孔板中舊的培養(yǎng)基,
       3.將含不同濃度嘌呤霉素(1ug/mL,2ug/mL,3ug/mL,4ug/mL,5 ug/mL,6ug/mL,7ug/mL)的新鮮培養(yǎng)基加入已鋪有細(xì)胞的24孔板,
       4.每2天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基,
       5.每天觀察細(xì)胞的存活比例,

       6.最小的嘌呤霉素使用濃度就是從嘌呤霉素篩選開始1-4d內(nèi)殺死所有細(xì)胞的篩選濃度。

 

 

 

      b.嘌呤霉素篩選轉(zhuǎn)染細(xì)胞
      1.第一天,將轉(zhuǎn)染的細(xì)胞按每孔0.05million鋪入24孔板,孵育過夜
      2.第二天,除去24孔板中舊的培養(yǎng)基,
      3.加入含嘌呤霉素(2ug/mL)的篩選培養(yǎng)基,孵育,
      4.每2天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基,
      5.每天觀察細(xì)胞的存活比例,
      6.在同一時(shí)間點(diǎn)(2d)存活的細(xì)胞,即為轉(zhuǎn)染成功細(xì)胞,
      7.對(duì)篩選后的細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增。

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