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小動(dòng)物活體成像技術(shù)

來源:西安昊興生物科技有限公司   2021年08月13日 10:18  

分子成像的發(fā)展:       

       1999年,美國哈佛大學(xué)Weissleder等人提出了分子影像學(xué)(molecular imaging)的概念——應(yīng)用影像學(xué)方法,對活體狀態(tài)下的生物過程進(jìn)行細(xì)胞和分子水平的定性和定量研究。傳統(tǒng)成像大多依賴于肉眼可見的身體、生理和代謝過程在疾病狀態(tài)下的變化,而不是了解疾病的特異性分子事件;分子成像則是利用特異性分子探針追蹤靶目標(biāo)并成像。這種從非特異性成像到特異性成像的變化,為疾病生物學(xué)、疾病早期檢測、定性、評估和治療帶來了重大的影響。

       分子成像技術(shù)使活體動(dòng)物體內(nèi)成像成為可能,它的出現(xiàn),歸功于分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)的發(fā)展、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型的使用、新的成像藥物的運(yùn)用、高特異性的探針、小動(dòng)物成像設(shè)備的發(fā)展等諸多因素。分子成像技術(shù)可用于——研究觀測特異性細(xì)胞、基因和分子的表達(dá)或互作過程,同時(shí)檢測多種分子事件,追蹤靶細(xì)胞,藥物和基因治療*化,從分子和細(xì)胞水平對藥物療效進(jìn)行成像,從分子病理水平評估疾病發(fā)展過程,對同一個(gè)動(dòng)物或病人進(jìn)行時(shí)間、環(huán)境、發(fā)展和治療影響跟蹤。

分子成像的特點(diǎn):

        分子成像和傳統(tǒng)的體外成像或細(xì)胞培養(yǎng)相比有著明顯優(yōu)點(diǎn)。首先,分子成像能夠反映細(xì)胞或基因表達(dá)空間和時(shí)間分布,從而了解活體動(dòng)物體內(nèi)的相關(guān)生物學(xué)過程、特異性基因功能和相互作用。第二,由于可以對同一個(gè)研究個(gè)體進(jìn)行長時(shí)間反復(fù)跟蹤成像,既可以進(jìn)步數(shù)據(jù)的可比性,避免個(gè)體差異對試驗(yàn)結(jié)果的可影響,又不需要?dú)⑺?/span>模式動(dòng)物,節(jié)省了大筆科研用度。第三,尤其在藥物開發(fā)方面,分子成像更是具有劃時(shí)代的意義。根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果,由于進(jìn)進(jìn)臨床研究的藥物中大部分由于安全題目而終止,導(dǎo)致了在臨床研究中大量的資金浪費(fèi),而分子成像技術(shù)的問世,為解決這一困難提供了廣闊的空間,將使藥物在臨床前研究中通過利用分子成像的方法,獲得更具體的分子或基因述水平的數(shù)據(jù),這是用傳統(tǒng)的方法無法了解的領(lǐng)域,所以分子成像將對新藥研究的模式帶來革命性變革。其次,在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、動(dòng)物基因打靶或制藥研究過程中,分子成像能對動(dòng)物的性狀進(jìn)行跟蹤檢測,對表型進(jìn)行直接觀測和(定量)分析。


分子成像的應(yīng)用領(lǐng)域:

       癌癥與抗癌藥物研究 ,免疫學(xué)與干細(xì)胞研究,細(xì)胞凋零,病理機(jī)制及病毒研究,基因表達(dá)和蛋白質(zhì)之間相互作用,轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型構(gòu)建,藥效評估,藥物甄選與預(yù)臨床檢驗(yàn),藥物配方與劑量管理,腫瘤學(xué)應(yīng)用,生物光子學(xué)檢測,食品監(jiān)督與環(huán)境監(jiān)督等。


小動(dòng)物活體成像的基本原理:

光學(xué)原理:

      熒光發(fā)光是通過激發(fā)光激發(fā)熒光基團(tuán)到達(dá)高能量狀態(tài),而后產(chǎn)生發(fā)射光。同生物發(fā)光在動(dòng)物體內(nèi)的穿透性相似,紅光的穿透性在小動(dòng)物體內(nèi)比藍(lán)綠光的穿透性要好,隨著發(fā)光信號在體內(nèi)深度的增加,波長越接近900nm的光線穿透能力越強(qiáng),同時(shí)科消減背景噪音的干擾,近紅外熒光為觀測生理指標(biāo)的*。在實(shí)驗(yàn)條件允許的條件下,應(yīng)盡量選擇發(fā)射波長較長的熒光蛋白或染料。

 標(biāo)記原理:活體熒光成像技術(shù)主要有三種標(biāo)記方法。

       1、熒光蛋白標(biāo)記:熒光蛋白適用于標(biāo)記細(xì)胞、病毒、基因等,通常使用的是GFP、EGFP、RFP等。

       2、熒光染料標(biāo)記:熒光染料標(biāo)記和體外標(biāo)記方法相同,常用的有Cy3、Cy5、Cy5.5及Cy7等,可以標(biāo)記抗體、多肽、小分子藥物等。

       3、量子點(diǎn)標(biāo)記:量子點(diǎn)是一種能發(fā)射熒光的半導(dǎo)體納米微晶體,主要應(yīng)用在活細(xì)胞實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)熒光觀察與成像。


注意事項(xiàng):

        熒光發(fā)光需要激發(fā)光,但生物體內(nèi)很多物質(zhì)在受到激發(fā)光激發(fā)后,也會發(fā)出熒光,產(chǎn)生的非特異性熒光會影響到檢測靈敏度。特別是當(dāng)發(fā)光細(xì)胞深藏于組織內(nèi)部,則需要較高能量的激發(fā)光源,也就會產(chǎn)生很強(qiáng)的背景噪音。生物發(fā)光作為體內(nèi)報(bào)告源,不需要激發(fā)光的激發(fā),它是以酶和底物的特異作用而發(fā)光,且動(dòng)物體自身不會發(fā)光,這樣生物發(fā)光就具有極低的背景。對于不同的研究,可根據(jù)兩者的特點(diǎn)以及實(shí)驗(yàn)要求,選擇合適的方法。



        


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