酶標(biāo)聚合物法(labelled dextran polymer,LDP)法應(yīng)用了酶標(biāo)聚合物技術(shù),如EnVision檢測(cè)系統(tǒng),首先將辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶標(biāo)記在葡聚糖聚合物上,然后再與第二抗體連接而形成EnVision二抗。
LDP法屬于二步法,特異性一抗和組織細(xì)胞抗原結(jié)合后,再用EnVision二抗與抗原抗體復(fù)合物中的一抗結(jié)合,最后通過(guò)EnVision二抗上的酶參與顯色反應(yīng)。
由于EnVision二抗中的聚合物結(jié)構(gòu)的*,可以連接更多的二抗,使每個(gè)多聚物有超過(guò)20個(gè)位點(diǎn)與di一抗體結(jié)合,聚合物上能標(biāo)記上的酶數(shù)量較多。因此在顯色時(shí)有充足的酶與顯色劑起反應(yīng)。
因此LDP法的敏感性高于ABC、LSAB等方法。此外,LDP法中的第二抗體沒(méi)有生物素的存在,不會(huì)出現(xiàn)ABC、LSAB等方法中含有的生物素與組織中內(nèi)源性生物素起交叉反應(yīng)的現(xiàn)象,因此LDP法的非特異性背景染色極低。
增強(qiáng)聚合物一步法(enhanced polymer one setp,EPOS)法也屬于酶標(biāo)聚合物法,和LDP法一樣,是利用酶標(biāo)聚合物技術(shù),將辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記在葡聚糖聚合物上,然后再與di一抗體連接而形成EPOS一抗。
EPOS法屬于直接法,直接用EPOS一抗特異性和組織細(xì)胞抗原結(jié)合后,一抗上的酶參與顯色反應(yīng)。由于EPOS一抗中的聚合物上能標(biāo)記上的酶數(shù)量較多,在顯色時(shí)有充足的酶與顯色劑起反應(yīng)。因此EPOS法雖然是直接法,但具有高敏感性。
此外,EPOS一抗沒(méi)有生物素的存在,不會(huì)出現(xiàn)ABC、LSAB等方法中含有的生物素與組織中內(nèi)源性生物素起交叉反應(yīng)的現(xiàn)象,背景清晰。但EPOS一抗種類(lèi)較少,難以普及。
催化信號(hào)放大(catlyzed signal amplification,CSA)法是應(yīng)用一種放大試劑生物素化酪胺,與抗生物素蛋白鏈菌素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物(streptavidin biotin-HRP)連接,在過(guò)氧化物酶作用下形成大量的生物素沉積物,再加入抗生物素蛋白鏈菌素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物后,過(guò)氧化物酶與生物素沉積物形成大量的過(guò)氧化物酶聚合,聚合的過(guò)氧化物酶與顯色劑起反應(yīng)。在第三步應(yīng)用了SABC法的SABC-HRP復(fù)合物,第五步應(yīng)用了LSAB法的SA-HRP復(fù)合物。
由于CSA法加入了催化信號(hào)放大試劑,使信號(hào)不斷放大,因此敏感性比EPOS一步法、EnVision二步法、PAP/APPAP法、LSAB(S-P)法和SABC等方法高。特別適用于檢測(cè)較弱的組織抗原。
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