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模型動(dòng)物小課堂（一）：常用6個(gè)動(dòng)物模型SOP
1、肺纖維化模型
大鼠肺纖維化模型
SD大鼠，鼠齡6-8周齡，體重200g左右，氣管內(nèi)給藥。稱重大鼠，麻醉后將大鼠仰臥固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)，切開頸部的皮膚，鈍性分離頸部的肌肉，充分暴露氣管，行氣管切開術(shù)，模型組(BLM組)緩慢注人5 mg/kg BLM 0.1mL，立即旋轉(zhuǎn)動(dòng)物，使藥液在肺內(nèi)均勻分；對(duì)照組同上方法注入生理鹽水0.1 ml，分籠飼養(yǎng)，自由飲水。期間動(dòng)物會(huì)出現(xiàn)背毛凌亂，體重減輕現(xiàn)象，會(huì)有少量死亡現(xiàn)象。
模型鑒定
造模14天后，可進(jìn)行肺部CT觀測(cè)。
HE與MASSON肺組織病理檢測(cè)觀察
小鼠肺纖維化模型
成年雄性ICR小鼠，體重25-28g，氣管內(nèi)給藥。稱重小鼠，麻醉后將小鼠仰臥固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)，切開頸部的皮膚，鈍性分離頸部的肌肉，充分暴露氣管，行氣管切開術(shù)，模型組(BLM組)緩慢注人5 mg/kg BLM 50 μl，立即旋轉(zhuǎn)動(dòng)物，使藥液在肺內(nèi)均勻分；對(duì)照組同上方法注入生理鹽水50 μl，分籠飼養(yǎng)，自由飲水。期間動(dòng)物會(huì)出現(xiàn)背毛凌亂，體重減輕現(xiàn)象，會(huì)有少量死亡現(xiàn)象。
2、潰瘍性結(jié)腸炎模型
小鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型
6-8周雄性C57BL/6小鼠，予3%DSS常飲法造模，給DSS14天(小鼠每只/天飲水量大約是5ml),構(gòu)建小鼠結(jié)腸炎模型。在 UC 造模期間，每天稱取小鼠體重，觀察小鼠糞便稠度及出血情況，進(jìn)行 DAI評(píng)分,分別就體重降低、糞便稠度、出血三個(gè)參數(shù)計(jì)算 DAI，DAI=(體重評(píng)分+糞便稠度評(píng)分+出血評(píng)分)/3
(a)體重減少%=[-(實(shí)驗(yàn)當(dāng)天的體重-原始體重)/原始體重*100，0分≤1%，
1 分=1%-5%，2 分=5%-10%，3 分=10%-15%，4 分≥15%]；
(b)糞便稠度(0 分：糞便正常，2 分：糞便稀松，4 分：腹瀉)；
(c)出血(0 分：陰性未發(fā)現(xiàn),出血情況，2 分：陽性發(fā)現(xiàn)出血情況，4
分：發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重出血情況).
大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型
雄性Wistar 大鼠200-230g，予5%DSS常飲法造模，給DSS14天,構(gòu)建小鼠結(jié)腸炎模型。在 UC 造模期間，每天稱取大鼠體重，觀察大鼠糞便稠度及出血情況，進(jìn)行 DAI評(píng)分,進(jìn)行 DAI評(píng)分,分別就體重降低、糞便稠度、出血三個(gè)參數(shù)計(jì)算 DAI，DAI=(體重評(píng)分+糞便稠度評(píng)分+出血評(píng)分)/3
(a)體重減少%=[-(實(shí)驗(yàn)當(dāng)天的體重-原始體重)/原始體重*100，0分≤1%，
1 分=1%-5%，2 分=5%-10%，3 分=10%-15%，4 分≥15%]；
(b)糞便稠度(0 分：糞便正常，2 分：糞便稀松，4 分：腹瀉)；
(c)出血(0 分：陰性未發(fā)現(xiàn),出血情況，2 分：陽性發(fā)現(xiàn)出血情況，4
分：發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重出血情況).
3、慢性心衰模型
大鼠慢性心衰模型
Wistar雄性大鼠200g-250g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，阿霉素腹腔注射給藥2.5mg/kg/周，連續(xù)給藥6周，超聲心電圖記記錄以下血流動(dòng)力學(xué)參數(shù):心率(HR)、左室收縮壓(LVSP)、左室舒張末壓(LVEDP)、舒張壓(DAP)、收縮壓(SAP)、平均動(dòng)脈壓(MAP)、左室壓力最大上升及下降速度(±dp/dtmax)進(jìn)行測(cè)定。
小鼠慢性心衰模型
體重在25-30g之間的雄性C57BL/6J小鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。小鼠在建立模型前8小時(shí)禁止飲水及進(jìn)食，每一只小鼠都要稱體重并記錄下體重值，模型組給予鹽酸阿霉素 (輝瑞制藥有 限公 司)腹腔注射 ，2mg/kg，前 5次每 3d注射1次， 以后每 7d注射 1次 ，累計(jì)用量 22mg/kg。給藥10周。采用超聲心動(dòng)圖檢測(cè)小鼠心臟功能：心率(HR)、左室收縮壓(LVSP)、左室舒張末壓(LVEDP)、舒張壓(DAP)、收縮壓(SAP)、平均動(dòng)脈壓(MAP)、左室壓力最大上升及下降速度(±dp/dtmax)。
4、癲癇模型
大鼠癲癇模型
9周齡健康雄性SD大鼠，海馬區(qū)腦立體定位注射20 mM海人酸1μl構(gòu)建癲癇模型，注射海人酸后即可觀察大鼠行為，觀察時(shí)間是4h。海人酸注射大鼠發(fā)生的癇性發(fā)作按Racine分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定：0級(jí)，無驚厥；I級(jí)，咀嚼、眨眼、立須等面部肌肉抽搐；II級(jí)，以點(diǎn)頭運(yùn)動(dòng)為主的頸部肌肉抽搐；III級(jí)，單側(cè)前肢陣攣、抽搐；IV級(jí)，雙側(cè)前肢陣攣、抽搐伴身體立起；V級(jí)，雙側(cè)后肢強(qiáng)直，身體背曲強(qiáng)直，跌倒伴全身陣攣。0級(jí)為正常，I-III級(jí)為癲癇部分性發(fā)作，IV~V級(jí)為癲癇大發(fā)作；凡在觀察時(shí)間內(nèi)連續(xù)出現(xiàn)3次IV~V級(jí)發(fā)作者即為成功癲癇模型。
小鼠癲癇模型
8-10周健康雄性C57BL/6小鼠，將小鼠置于立體定位儀上，根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索并優(yōu)化麻醉劑用量、海人酸注射量和注射部位的各參數(shù)，得到以大腦Bregma為原點(diǎn)的海馬定位注射坐標(biāo)：-2.0、-1.8、-2.3 mm(右側(cè)海馬)，進(jìn)行單側(cè)注射海人酸12 mg/kg后，觀察其行為表現(xiàn)。以在急性期出現(xiàn)持續(xù)l h以上的III 級(jí)以上發(fā)作，即為成功癲癇模型。
5、帕金森模型
大鼠帕金森模型
選取雄性 SD 大鼠 ，體質(zhì)量 250 ～300 g，進(jìn)行腦立體定位手術(shù)，麻醉后，將大鼠頭部固定于腦立體定位儀，顱骨暴露出 2 點(diǎn)，腦黑質(zhì)坐標(biāo)：(1)anterior-posterior(AP): 5.2 mm; medial-lateral (ML): 1.9 mm; deep ventral(DV): 8.2 mm, (2) AP: 5.5 mm; ML: 2.4 mm; DV: 7.6 mm，并注入藥物，正常對(duì)照組每側(cè)注入含0.2%抗壞血酸 0.9%氯化鈉注射液 3 μl，6-OHDA 處理實(shí)驗(yàn)組每側(cè)注入濃度為 2.5mg/ml 的6-OHDA 溶液3 μl(溶劑為含0.2%抗壞血酸 0.9%氯化鈉注射液)。
鑒定：(1)大鼠經(jīng) 6-OHDA 損毀兩周后，在黑暗安靜的環(huán)境下腹腔注射 APO 溶液(1mg·kg-1)，單獨(dú)置于籠內(nèi)，觀察其行為變化，5min 后開始計(jì)算旋轉(zhuǎn)圈數(shù)，以向
健(左)側(cè)、首尾相接、環(huán)曲 360°者計(jì)一圈，記錄 5min，若旋轉(zhuǎn)>7r·min-1 或>35r·5min-1(*毀損)視為建模成功；旋轉(zhuǎn)<7r·min-1 或<35r·5min-1(部分毀 損)及 15min 無旋轉(zhuǎn)或向右側(cè)旋轉(zhuǎn)者均視為建模失敗;(2)HE染色觀察腦組織病理學(xué)變化
小鼠帕金森模型
C57BL / 6 雄性小鼠,8 周齡,體質(zhì)量 20 ~ 22 g，小 將動(dòng)物固定在立體定位儀(上,沿顱 頂矢狀縫切開皮膚,暴露前囟( Bregma)。 在前囟前 (AP)+0. 5 mm,中線旁(ML) -2. 0 mm(右側(cè)) 打孔。 微量進(jìn)樣器緩慢下行,先后分別在 顱骨下(DV)-3. 0 mm 和-2. 0 mm 各注入 6-OHDA 溶 液 0. 78 μL,速度 0. 5 μL·min-1 ,每次注射完成后需 留針 3 min。 勻速退出進(jìn)樣器,縫合處理創(chuàng)面。
鑒定：術(shù)后的 5 周中,每周腹腔注射 0. 125 g·L-1 的 APO(0. 5 μg·g-1 )觀察動(dòng)物旋轉(zhuǎn)情況。 將動(dòng)物放置在 500 mL 的燒杯里,杯底附新鮮干燥墊料,計(jì)數(shù) 30 min 內(nèi),小鼠向未損傷側(cè)的旋轉(zhuǎn)圈數(shù),每旋轉(zhuǎn) 360 度記為 1 圈。 統(tǒng)計(jì)結(jié)果以旋轉(zhuǎn)次數(shù)(rotation·30 min-1 )表示。
6、糖尿病模型
大鼠二型糖尿病模型
8周齡雄性SD大鼠(200g左右)，用高脂高糖飼料喂養(yǎng)4周后禁食12小時(shí)，腹腔注射配制好的鏈脲佐菌素溶液30 mg/kg，連續(xù)注射3天。4天后檢測(cè)空腹血糖值，當(dāng)空腹血糖≥ 11.1mmol/L時(shí)，并且高血糖持續(xù)兩周且無恢復(fù)現(xiàn)象者可作為成功模型。
小鼠二型糖尿病模型
C57BL/6 雄性小鼠(20g左右)，用高脂高糖飼料喂養(yǎng)4周后禁食12小時(shí)，腹腔注射配制好的鏈脲佐菌素溶液30 mg/kg，連續(xù)注射3天。4天后檢測(cè)空腹血糖值，當(dāng)空腹血糖≥ 11.1mmol/L時(shí)，并且高血糖持續(xù)兩周且無恢復(fù)現(xiàn)象者可作為成功模型。
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