如何制作熒光顯微鏡標(biāo)本

北京北方安道科技——顯微鏡專業(yè)供應(yīng)商
   王瓊
：010 - 57199813 / 82908752

地址：北京市海淀區(qū)西三旗上奧世紀(jì) 2B-1026

一、熒光顯微鏡標(biāo)本制作要求
　?。ㄒ唬┹d玻片

　　載玻片厚度應(yīng)在0.8～1.2mm之間，太厚的坡片，一方面光吸收多，另一方面不能使激發(fā)光在標(biāo)本上聚集。載玻片必須光潔，厚度均勻，無(wú)明顯自發(fā)熒光。有時(shí)需用石英玻璃載玻片。

　　（二）蓋玻片

　　蓋玻片厚度在0.17mm左右，光潔。為了加強(qiáng)激發(fā)光，也可用干涉蓋玻片，這是一種特制的表面鍍有若干層對(duì)不同波長(zhǎng)的光起不同干涉作用的物質(zhì)（如氟化鎂）的蓋玻片，它可以使熒光順利通過(guò)，而反射激發(fā)光，這種反射的激發(fā)光女可激發(fā)標(biāo)本。

　　（三）標(biāo)本

　　組織切片或其他標(biāo)本不能太厚，如太厚激發(fā)光大部分消耗在標(biāo)本下部，而物鏡直接觀察到的上部不充分激發(fā)。另外，細(xì)胞重迭或雜質(zhì)掩蓋，影響判斷。

　　（四）封裱劑

　　封裱劑常用甘油，必須無(wú)自發(fā)熒光，無(wú)色透明，熒光的亮度在pH8.5～9.5時(shí)較亮，不易很快褪去。所以，常用甘油和0.5mol/l pH9.0～9.5的碳酸鹽緩沖液的等量混合液作封裱劑。

　?。ㄎ澹╃R油

　　一般暗視野熒光顯微鏡和用油鏡觀察標(biāo)本時(shí)，必須使用鏡油，使用特制的無(wú)熒光鏡油，也可用上述甘油代替，液體石蠟也可用，只是折光率較低，對(duì)圖像質(zhì)量略有影響。

二、使用熒光顯微鏡的注意事項(xiàng)
　　（1）嚴(yán)格按照熒光顯微鏡出廠說(shuō)明書要求進(jìn)行操作，不要隨意改變程序。
　?。?）應(yīng)在暗室中進(jìn)行檢查。進(jìn)入暗室后，接上電源，點(diǎn)燃超高壓汞燈5～15min，待光源發(fā)出強(qiáng)光穩(wěn)定后，眼睛*適應(yīng)暗室，再開始觀察標(biāo)本。
　?。?）防止紫外線對(duì)眼睛的損害，在調(diào)整光源時(shí)應(yīng)戴上防護(hù)眼鏡。
　?。?）檢查時(shí)間每次以1～2h為宜，超過(guò)90min，超高壓汞燈發(fā)光強(qiáng)度逐漸下降，熒光減弱；標(biāo)本受紫外線照射3～5min后，熒光也明顯減弱；所以，zui多不得超過(guò)2～3h。
　?。?）熒光顯微鏡光源壽命有限，標(biāo)本應(yīng)集中檢查，以節(jié)　省時(shí)間，保護(hù)光源。天熱時(shí)，應(yīng)加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應(yīng)從開始就記錄使用時(shí)間。燈熄滅后欲再用時(shí)，須待燈泡充分冷卻后才能點(diǎn)燃。一天中應(yīng)避免數(shù)次點(diǎn)燃光源。
　　（6）標(biāo)本染色后立即觀察，因時(shí)間久了熒光會(huì)逐漸減弱。若將標(biāo)本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時(shí)間，防止封裱劑蒸發(fā)。
　?。?）熒光亮度的判斷標(biāo)準(zhǔn)：一般分為四級(jí)，即“一”—無(wú)或可見(jiàn)微弱熒光。“+”—僅能見(jiàn)明確可見(jiàn)的熒光。“++”—可見(jiàn)有明亮的熒光。“+++”—可見(jiàn)耀眼的熒光。

三、熒光圖像的記錄方法
　　熒光顯微鏡所看到的熒光圖像，一是具有形態(tài)學(xué)特征，二是具有熒光的顏色和亮度，在判斷結(jié)果時(shí)，必須將二者結(jié)合起來(lái)綜合判斷。結(jié)果記錄根據(jù)主觀指標(biāo)，即憑工作者目力觀察。作為一般定性觀察，基本上可靠的。隨著技術(shù)科學(xué)的發(fā)展，在不同程度上采用客觀指標(biāo)記錄判斷結(jié)果，如用細(xì)胞分光光度計(jì)，圖像分析儀等儀器。但這些儀器記錄的結(jié)果，也必須結(jié)合主觀的判斷。

　　熒光顯微鏡攝影技術(shù)對(duì)于記錄熒光圖像十分必要，由于熒光很易褪色減弱，要即時(shí)攝影記錄結(jié)果。方法與普通顯微攝影技術(shù)基本相同。只是需要采用高速感光膠片如ASA200以上或24。以上。因紫外光對(duì)熒光猝滅作用大，如FITC的標(biāo)記物，在紫外光下照射30s，熒光亮度降低50%。所以，曝光速度太慢，就不能將熒光圖像拍攝下來(lái)。一般研究型熒光顯微鏡都有半自動(dòng)或全自動(dòng)顯微攝影系統(tǒng)裝置。

    北京北方安道科技有限公司專業(yè)經(jīng)營(yíng)范圍：尼康顯微鏡、奧林巴斯顯微鏡、工業(yè)顯微鏡、金相顯微鏡、測(cè)量顯微鏡、偏光顯微鏡、數(shù)碼顯微鏡、生物顯微鏡、體視顯微鏡、顯微鏡數(shù)碼相機(jī)接口、多波段冷光源、體視顯微鏡冷光源、數(shù)碼圖像處理系統(tǒng)及代理國(guó)內(nèi)外專業(yè)生產(chǎn)廠商的先進(jìn)高科技儀器（包括：進(jìn)口顯微鏡、離心機(jī)、天平、超低溫冰箱等）。
    北京北方安道科技有限公司擁有一支由專業(yè)技術(shù)人員、銷售人員和維修人員組成的強(qiáng)大隊(duì)伍，能為廣大客戶提供專業(yè)的顯微鏡技術(shù)咨詢、產(chǎn)品選配、安裝調(diào)試、應(yīng)用指導(dǎo)、維護(hù)保養(yǎng)在內(nèi)的整套服務(wù)。

經(jīng)營(yíng)品牌
    奧林巴斯
奧林巴斯CX21
奧林巴斯CX31生物顯微鏡
奧林巴斯CX41生物顯微鏡
奧林巴斯SZ51/SZ61體視顯微鏡
奧林巴斯SZX7/SZX10/SZX16體視顯微鏡
奧林巴斯CKX41/ CKX31倒置顯微鏡
奧林巴斯BX41/BX51臨床級(jí)顯微鏡
奧林巴斯IX71/IX81研究級(jí)倒置顯微鏡

    尼康
尼康ECLIPSE E200生物顯微鏡
尼康ECLIPSE E100生物顯微鏡
尼康SMZ645/SMZ660體視顯微鏡
尼康SMZ445/SMZ460體視顯微鏡
尼康TS100/TS100-F倒置生物顯微鏡
尼康Ti-E/U/S系列研究級(jí)倒置生物顯微鏡
尼康50i/55i/80i/90i研究級(jí)生物顯微鏡

   實(shí)驗(yàn)室天平
瑞士梅特勒電子天平