全球超過 10% 的人口患有慢性腎?。–KD）。糖尿病和高血壓是導(dǎo)致終末期腎?。‥SRD）發(fā)展的主要原因，常與腎小球有關(guān)。高血壓被認(rèn)為會特異性地?fù)p害足細(xì)胞，足細(xì)胞是腎小球中一種終末分化的上皮細(xì)胞類型。
為了防止腎小球高血壓引起的足細(xì)胞脫離和損傷，就必須了解負(fù)責(zé)的機械傳感器。研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)的足細(xì)胞具有機械敏感性，并且機械應(yīng)力和流動誘導(dǎo)的剪切應(yīng)力會改變它們的肌動蛋白細(xì)胞骨架以及基因表達(dá)。然而，負(fù)責(zé)肌動蛋白重組的機械傳感器仍然未知。細(xì)絲蛋白是肌動蛋白結(jié)合蛋白家族，對于肌動蛋白細(xì)胞骨架的分支、肌動蛋白絲與整聯(lián)蛋白等跨膜蛋白的交聯(lián)以及通過其 24 個 Ig 樣結(jié)構(gòu)域結(jié)合大量信號分子至關(guān)重要，在機械感應(yīng)和信號傳導(dǎo)中起著核心作用。雖然細(xì)絲蛋白 A 和 B 在人體中廣泛分布，但細(xì)絲蛋白 C 仍在骨骼系統(tǒng)和心肌中表達(dá)。幾項研究表明，Ig 結(jié)構(gòu)域 20-21 可能對細(xì)絲蛋白 A 的機械傳感至關(guān)重要。在這里，來自德國格賴夫斯瓦爾德大學(xué)醫(yī)學(xué)院解剖和細(xì)胞生物學(xué)系、埃爾朗根-紐倫堡大學(xué)醫(yī)學(xué)院腎臟病理學(xué)系等領(lǐng)域的研究團(tuán)隊描述了細(xì)絲蛋白 A 對肌動蛋白細(xì)胞骨架完整性、拉伸和未拉伸條件下粘著斑的組裝及其對培養(yǎng)足細(xì)胞遷移的影響。結(jié)果表明，細(xì)絲蛋白負(fù)責(zé)基質(zhì)-肌動蛋白細(xì)胞骨架的相互作用，因此對于體外和體內(nèi)足細(xì)胞的粘附至關(guān)重要。機械應(yīng)力增加細(xì)絲蛋白 A 和 B 的表達(dá)為了確定機械拉伸是否調(diào)節(jié)細(xì)絲蛋白的表達(dá)，足細(xì)胞培養(yǎng)后進(jìn)行三天的拉伸（0.5 Hz ，5% 伸長率）。通過免疫熒光染色和 qRT-PCR 分析在拉伸（S）和未拉伸（US）足細(xì)胞中分析細(xì)絲蛋白的表達(dá)。結(jié)果觀察到由于機械應(yīng)力，足細(xì)胞肌動蛋白細(xì)胞骨架從橫向應(yīng)力纖維重組為徑向應(yīng)力纖維。此外，發(fā)現(xiàn)細(xì)絲蛋白 A 與 F-肌動蛋白在富含肌動蛋白的中心共定位。qRT-PCR 分析細(xì)絲蛋白亞型的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)由于機械應(yīng)力，細(xì)絲蛋白 A 和 B mRNA 表達(dá)分別顯著增加至 134 ± 6% 和 181 ± 15%。相比之下，細(xì)絲蛋白 C 的表達(dá)沒有顯著變化（103 ± 15%）。使用 qRT-PCR 分析，發(fā)現(xiàn)細(xì)絲蛋白 A 是小鼠足細(xì)胞細(xì)胞系 SVI 中主要表達(dá)的亞型，于是首先將研究重點放在細(xì)絲蛋白 A 上。細(xì)絲蛋白 A 的敲低影響培養(yǎng)的足細(xì)胞中的 F-肌動蛋白組織使用特異性 siRNA 在培養(yǎng)的小鼠足細(xì)胞中敲低細(xì)絲蛋白 A。免疫熒光和蛋白質(zhì)印跡驗證了敲低效率, 結(jié)果顯示，與對照組相比，細(xì)絲蛋白 A 蛋白水平顯著降低至 23 ± 7%。在對細(xì)絲蛋白 A 的特異性 siRNA 處理后，觀察到肌動蛋白纖維在細(xì)絲蛋白 A 敲低足細(xì)胞（Flna KD）中特異性重組。與對照組相比，在 Flna KD 足細(xì)胞中，肌動蛋白纖維的相對一致性顯著降低至 58 ± 2%。然而，肌動蛋白的總蛋白量不受影響，并且蛋白質(zhì)印跡測定 Flna KD 和 Ctrl 之間沒有差異。同時敲低細(xì)絲蛋白 A 和 B 可減少機械拉伸過程中足細(xì)胞的粘附為了研究細(xì)絲蛋白 A 在暴露于機械應(yīng)力培養(yǎng)的足細(xì)胞中的作用，實驗將 Flna KO 和對照細(xì)胞拉伸了三天。令人驚訝的是，與對照足細(xì)胞相比，F(xiàn)lna KO 足細(xì)胞在機械拉伸三天后僅顯示輕微但不顯著的足細(xì)胞數(shù)量減少。然而發(fā)現(xiàn) Flna KO 足細(xì)胞表達(dá)的細(xì)絲蛋白 B 比對照細(xì)胞高 6 倍。這表明細(xì)絲蛋白 B 能夠補償細(xì)絲蛋白 A 的損失。因此，使用 siRNA 同時敲低 Flna 和 Flnb。通過 qRT-PCR、免疫細(xì)胞化學(xué)和蛋白質(zhì)印跡驗證敲低的效率。機械拉伸 2 天后，與對照組相比，42 ± 6% 的細(xì)絲蛋白 A/B KD 足細(xì)胞缺失。相比之下，分別敲除 Flna 或 Flnb 對機械拉伸后的細(xì)胞數(shù)量沒有顯著影響，表明細(xì)絲蛋白 A 和 B 對拉伸的足細(xì)胞粘附具有重要作用。此外，觀察到機械應(yīng)力影響拉伸誘導(dǎo)的 F-肌動蛋白細(xì)胞骨架重組和剩余細(xì)絲蛋白 A/B KD 足細(xì)胞中肌動蛋白聚合中心（ARCs）的形成。只有 7% 的雙敲除足細(xì)胞中產(chǎn)生了 ARCs，與對照相比減少了 89%。相反，與對照組相比，F(xiàn)lna KD 和 Flnb KD 足細(xì)胞僅顯示出輕微但不顯著的 ARCs 減少。
為了確定細(xì)絲蛋白 A/B 雙敲除是否會影響粘著斑蛋白 talin、紐蛋白和樁蛋白的表達(dá)，通過 qRT-PCR 量化了 mRNA 水平，并通過免疫細(xì)胞化學(xué)分析量化了粘著斑的大小。在 Fln A/B KD 足細(xì)胞中，talin (-39 ± 6%)、紐蛋白 (-30 ± 9%) 和樁蛋白 (-28 ± 8%) 的 mRNA 表達(dá)顯著降低。此外，免疫細(xì)胞化學(xué)分析表明，細(xì)絲蛋白雙敲除顯著影響粘著斑的大小。量化顯示，與對照相比，在 Fln A/B KD 中，talin 的單個粘著斑區(qū)域大小減少了 27%，紐蛋白減少了 30%，樁蛋白減少了 20%。相比之下，僅細(xì)絲蛋白 A 的敲低并未降低粘著斑的表達(dá)和大小。
細(xì)絲蛋白A的缺失導(dǎo)致必需的肌動蛋白結(jié)合蛋白/穩(wěn)定蛋白（如synaptopodin、fasin和palladin）以及粘著斑蛋白（如talin、paxillin和ezrin）的表達(dá)減少。這可能會導(dǎo)致肌動蛋白絲的穩(wěn)定性降低。各種整聯(lián)蛋白表達(dá)的變化證明了細(xì)絲蛋白A對足細(xì)胞的重要性。細(xì)絲蛋白A缺失后，細(xì)絲蛋白B表達(dá)強烈增加，提示足細(xì)胞中可能存在一種補償機制。
總之，該研究表明，機械應(yīng)力在體外和體內(nèi)改變了足細(xì)胞中細(xì)絲蛋白 A 和 B 的表達(dá)，并以代償方式發(fā)揮作用。此外，細(xì)絲蛋白對于將外部機械信號轉(zhuǎn)化為細(xì)胞內(nèi)信號以穩(wěn)定肌動蛋白細(xì)胞骨架和避免足細(xì)胞脫離也很重要。
參考文獻(xiàn)：Greiten JK, Kliewe F, Schnarre A, Artelt N, Schr?der S, Rogge H, Amann K, Daniel C, Lindenmeyer MT, Cohen CD, Endlich K, Endlich N. The role of filamins in mechanically stressed podocytes. FASEB J. 2021 May;35(5):e21560. doi: 10.1096/fj.202001179RR. PMID: 33860543.
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