研究背景
盡管對牙周病的認(rèn)識有所提高,但目前的診斷和評估嚴(yán)重依賴于傳統(tǒng)方法,如牙周探診和視診是否有出血或菌斑。雖然這些方法應(yīng)用廣泛認(rèn)同度高,但通常需要有經(jīng)驗(yàn)的臨床醫(yī)生對每個特定的情況進(jìn)行客觀的評估。即使是非常有經(jīng)驗(yàn)的臨床醫(yī)生在進(jìn)行評估時仍然難以準(zhǔn)確監(jiān)測牙周病的進(jìn)展。此外這些方法也多會形成創(chuàng)口。目前評估方法之一是使用牙齦指數(shù)(Gingival Index)對牙齦炎癥程度打分,這需要探查已經(jīng)發(fā)炎的牙周組織,并可能導(dǎo)致不必要的疼痛和出血。通過探診法判斷出血情況的幾個牙齦炎指數(shù)如齦乳頭出血指數(shù)(papillary bleeding index)、邊緣探查出血情況和伊士曼齒間出血指數(shù)(Eastmaninterdental bleeding index)。但由于無法保證每次檢查的探診頻率和力度,這些方法的可靠性和可重復(fù)性也會受到質(zhì)疑。此外,不同患者的牙齦厚度和外觀情況也比較復(fù)雜,如牙周生物型不同,會導(dǎo)致上述方法產(chǎn)生更多變化和誤差。牙齦較薄的患者的牙齦可能會呈現(xiàn)出自然偏粉紅色的外觀,這可能誤導(dǎo)視診結(jié)果。因此如果要對牙周炎進(jìn)展進(jìn)行準(zhǔn)確診斷和評估,除牙齦指數(shù)之外,還需要進(jìn)行放射照相評估、附著喪失證據(jù)、牙齒活動性檢查等等。但即使加上這些復(fù)雜的檢測,仍然難以對疾病進(jìn)展進(jìn)行一個準(zhǔn)確即時的監(jiān)測。
為觀察牙齦組織的顯微結(jié)構(gòu)和脈管系統(tǒng),研究人員引入了光學(xué)相干斷層掃描(optical coherencetomography, OCT)和光學(xué)相干斷層掃描血管造影術(shù)(OCT angiography, OCTA),實(shí)現(xiàn)在體內(nèi)無創(chuàng)、定性和定量對牙齦組織成像。OCT是一種非接觸、非侵入性的成像方式,通過檢測組織的反向散射光,結(jié)合一定算法生成類似超聲波的橫截面圖像,分辨率可達(dá)微米級別。OCTA最初成功應(yīng)用在眼睛成像方面,具有分離動態(tài)和靜態(tài)信號的能力,俗稱血管和非血管信號。OCT和OCTA在眼科中的應(yīng)用非常成功,并且由于其能夠?qū)ξ⒀h(huán)網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行高分辨率3D成像這一優(yōu)勢,在神經(jīng)成像和皮膚病學(xué)研究中也得到應(yīng)用并取得一定成果。在牙科領(lǐng)域,約二十年前就有OCT用于口腔軟組織的報(bào)道,近期較為突出的進(jìn)展是是使用swept-source OCT 定量測量牙齦溝。現(xiàn)有文獻(xiàn)對OCT測定牙齦精細(xì)微結(jié)構(gòu),以及體內(nèi)觀測牙齦脈管系統(tǒng)的能力描述相差較大。本文將深度增強(qiáng)的swept-source OCT作為一種新的牙齦結(jié)構(gòu)和微血管3D成像技術(shù)。使用OCT和OCTA系統(tǒng)對距牙齦表面2 mm深處進(jìn)行掃描,視野在2 × 2和10 × 10 mm2之間,分辨率高達(dá)10 μm,并且能夠分辨牙齦內(nèi)的微毛細(xì)管環(huán)。
牙齦生物型
牙齦炎癥
OCT掃描角度如圖:
結(jié)果與討論
B-scan圖發(fā)現(xiàn)口腔上皮產(chǎn)生了高強(qiáng)度的掃描層,可能是一種散射度較高的介質(zhì)(圖2A)。臨床上認(rèn)為牙齦組織口腔上皮是一種分層的鱗狀角化上皮,從膜齦聯(lián)合延伸到齦緣。口腔上皮進(jìn)一步可細(xì)分為基底層、棘層、顆粒層和角質(zhì)層(圖2B),但OCT掃描圖下各層之間的分化界限并不明顯。
圖2通過3D OCT掃描得到的人體內(nèi)牙齦組織顯微結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)。(A)附著齦和游離齦OCT B-scan掃描圖,交替的亮條紋為上皮釘突,下暗區(qū)域?yàn)榻Y(jié)締組織。(B)牙齦的典型組織學(xué)切片,上皮釘突與(A)中OCT掃描出的橫截面類似。(C)250μm深度的正面截面圖,附著齦表現(xiàn)出蜂窩結(jié)構(gòu),齦緣沒有。(D)350μm深度的正面截面圖,蜂窩狀結(jié)構(gòu)更致密。
在口腔上皮的下方,結(jié)締組織通過上皮結(jié)締組織界面與上皮區(qū)分開,上皮結(jié)締組織界面上皮向結(jié)締組織的凸起稱為上皮釘突,結(jié)締組織向上皮釘突之間伸出突起,稱結(jié)締組織乳頭。在OCT掃描圖中可觀察到呈現(xiàn)對應(yīng)明暗的條紋(圖2A),與傳統(tǒng)的組織切片表現(xiàn)非常一致(圖2B)。en-face截面圖中(圖2C和圖3),交替的突起呈密集“蜂窩結(jié)構(gòu)”,尺寸在30至80μm之間,通常出現(xiàn)在200至300μm深度處,并隨深度增加而逐漸增加(圖2D)。這些圓形孔隙的模式最好描述為隨機(jī)的(在正面切片上)。牙槽粘膜區(qū)出現(xiàn)很少或根本沒有蜂窩結(jié)構(gòu)(圖3)。
圖3:正面OCT掃描切片圖清晰地描繪了牙齦中的蜂窩狀結(jié)構(gòu),深度取決于牙齦生物型。上為厚生物型,下位薄生物型。(A,D)厚薄型牙齦不同深度的正面OCT掃描切片,蜂窩結(jié)構(gòu)最初出現(xiàn)深度約為250μm。薄牙齦蜂窩狀結(jié)構(gòu)較小,部分被來自粘膜牙齦區(qū)域的軟組織(更亮且更均勻)所替代。 (B,E) 在中間深度,蜂窩結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)出較高對比度,“密度”和“廣度”情況顯示較為明顯。(C,F(xiàn))在網(wǎng)脊層之下,出現(xiàn)軟組織并顯示出光滑明亮的斑塊。厚生物型的蜂窩結(jié)構(gòu)通常比薄生物型的蜂窩結(jié)構(gòu)更厚、更深(在三個正面深度上觀察到),也更大(頰側(cè)面積更大)。牙齦表面以下> 350μm處為網(wǎng)狀皮層(圖3C,F(xiàn)),OCT掃描圖中呈現(xiàn)光滑的結(jié)構(gòu),有血管遮擋的陰影。炎癥發(fā)生時伴隨血管數(shù)量增加可能會使這部分結(jié)構(gòu)圖像發(fā)生變化更為明顯。由于正常健康牙齦中該層幾乎是均勻的,OCT掃描下反射強(qiáng)度較低,因此還無法進(jìn)行詳細(xì)觀察,只能根據(jù)表型如在牙齦中出現(xiàn)的深度,是否有局部異常拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)等來推測是否有炎癥。
牙齦在OCTA觀察下呈現(xiàn)出三個不同的區(qū)域:牙槽粘膜、附著齦和游離齦。這三個區(qū)域主要可以通過兩個方面來區(qū)分:不同血管的出現(xiàn),以及牙齦表面下每種血管類型的排列,如沿深度的出現(xiàn)順序、每種血管類型的方向和大小。
根據(jù)在OCTA下對人體牙齦的觀察,無論性別,至少有三種不同類型的血管,分別為:毛細(xì)血管(或毛細(xì)血管環(huán))、小聯(lián)結(jié)血管和大血管。據(jù)觀察,毛細(xì)血管是微出血血管,尺寸從12μm以下到30μm不等。這些毛細(xì)血管通常形成環(huán),在附著牙齦和牙槽粘膜表面延伸。游離齦毛細(xì)血管稍大并呈冠狀延伸。較大的聯(lián)結(jié)血管尺寸在30-200μm之間,通常出現(xiàn)在距牙齦表面200-600μm間,毛細(xì)血管也在這里匯集成更大的血管。除非牙齦發(fā)炎,否則這些小的連接血管很少出現(xiàn)在附著齦中,這可能會幫助我們發(fā)現(xiàn)牙齦炎和早期牙周炎。最終,聯(lián)結(jié)血管與大血管匯合,大血管尺寸通常在200-400μm之間,至少500μm深。
牙槽粘膜的特征是有致密的血管,包括所有三種類型的血管:小毛細(xì)血管,一般尺寸小于15μm,深度50-200μm;小的聯(lián)結(jié)血管,一般尺寸200-600μm之間,距牙齦表面約200-700μm深;大血管,尺寸通常在400μm以上,距牙齦表面約700μm以上。
附著齦中小的聯(lián)結(jié)血管較少,較大的血管也少且更深,約600-1300μm。附著齦中的大血管通常起源于牙槽粘膜區(qū)的大血管,延伸穿過附著齦,在游離牙齦區(qū)分裂成更小的血管。因此附著齦中的毛細(xì)血管環(huán)更長,通常從深層的大血管(約600-800μm深度)延伸到淺層(約50μm深度)。血管方向通常平行于牙齦表面的平面,即垂直于OCT掃描的en-face。
游離齦的特征是有聯(lián)結(jié)血管、致密且稍大的毛細(xì)血管(直徑可達(dá)30μm),偶爾有大血管終端。附著齦正截面上幾乎沒有聯(lián)結(jié)血管。聯(lián)結(jié)血管的區(qū)別與游離齦溝劃分的游離齦和附著齦結(jié)果較一致。本文通過OCT掃描附著齦和游離齦之間的表面拓?fù)渥兓瘉碜R別游離齦溝(圖1A)。圖4中代表游離齦溝的虛線與中間/深層聯(lián)結(jié)血管的出現(xiàn)情況一致。但并不是每個個體中都能觀察到明顯的游離齦溝,因此,我們依賴于中/深層小聯(lián)結(jié)血管的出現(xiàn)(圖4C,D,G,H)來確定附著/游離齦的邊界。由于小的聯(lián)結(jié)血管是逐漸出現(xiàn)在不同的深度的,而且由于個體不同牙齦厚度,我們無法選擇固定的正面深度來觀察聯(lián)結(jié)血管的出現(xiàn),此外基于牙齒的功能、不同的個體牙齦的生物類型和牙齦的狀況,聯(lián)結(jié)血管的排列情況也會變得極其復(fù)雜,因此我們認(rèn)為游離/附著齦之間存在的是一種漸進(jìn)的邊界。從我們最初的觀察來看,游離齦布滿小毛細(xì)血管和小聯(lián)結(jié)血管,這些血管最終與位于游離/附著齦連接處深處的大血管相連。小的聯(lián)結(jié)血管有時也會在平行于牙齦緣的方向上相互連接,逐漸與不同深度的較大血管匯合,并在附著齦中*消失。該區(qū)域的毛細(xì)血管環(huán)平行于正面平面,垂直于牙齦緣。游離牙齦毛細(xì)血管的平均尺寸在10到30μm之間,結(jié)締血管的平均尺寸在50到100 μm之間。
圖4男性(上排)和女性(下排)受試者健康牙齦的OCTA血管造影圖片中觀察到的不同血管模式。(A)男性受試者OCTA血管造影照片(深度超過1mm)。白色虛線表示游離齦溝。不同深度的正面切片觀察到的詳細(xì)的血管模式圖:(B)小毛細(xì)血管(淺層)。(C)小結(jié)締血管(中層)。(D)大血管(深層)。(E-H)為對應(yīng)女性受試者圖片。
表1總結(jié)了從OCTA觀察到的每個牙齦區(qū)域的血管特征。
牙齦結(jié)構(gòu)與生物型之間的關(guān)系
研究人員探討了不同生物型牙齦之間的結(jié)構(gòu)和脈管系統(tǒng),發(fā)現(xiàn)與目前對牙齦生物型的認(rèn)知判斷一致。OCT與OCTA相結(jié)合能夠較為明確的區(qū)分出不同生物型,這些能夠幫助我們了解不同生物型的功能特點(diǎn),以及治療過程中這些功能與組織應(yīng)答和組織愈合之間的關(guān)系。
圖5三名志愿者上切牙牙齦組織OCTA造影結(jié)果圖。A-D為牙齦健康的男性志愿者。E-H為牙齦健康的女性志愿者。I-L為右側(cè)門牙有明顯牙齦發(fā)炎的男性志愿者。顏色顯示血管深度,比例尺如圖。 (A-D) 健康的厚生物型,表現(xiàn)為表面毛細(xì)血管密集,但缺乏聯(lián)結(jié)血管和大的深層血管,特別是附著齦區(qū)域。 (E-H) 健康的薄生物型,聯(lián)結(jié)血管和大的深層血管明顯更多,特別在附著齦區(qū)域。(I-L)普通生物型但左側(cè)切牙發(fā)炎,發(fā)炎牙齦組織血管情況變化顯著,小的聯(lián)結(jié)血管(橙黃色)與其他三顆切牙相比明顯更密集。
圖6 不同生物型在特定深度的正面(en-face)及對應(yīng)垂直(B-scan)的OCTA圖。(A,B)厚生物型644 μm深度。(C,D)薄生物型的644 μm深度。(E,F(xiàn))厚生物型350 μm深度。(G,H)薄生物型350 μm深度。(I,J) “薄且呈扇形”的牙齦和“厚且平整”的牙齦照片,白色方框內(nèi)為3D OCT正面掃描的區(qū)域。垂直B-scan圖像可以直接觀察齦溝的深度和厚度來判斷生物型的臨床分類。
牙齦結(jié)構(gòu)與炎癥的關(guān)系
總結(jié)
參考文獻(xiàn):
Le, Nhan M. , et al. "A noninvasive imaging and measurement using optical coherence tomography angiography for the assessment of gingiva: An in vivo study." Journal of Biophotonics 11(2018):e201800242.
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