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查找一個特定細(xì)胞株的培養(yǎng)條件

來源:上海復(fù)祥生物科技有限公司   2022年06月10日 16:23  

培養(yǎng)基是細(xì)胞培養(yǎng)中*的營養(yǎng)成分,但是基礎(chǔ)的培養(yǎng)基卻給實驗者帶來了一系列的問題。

別小看細(xì)胞培養(yǎng),這里可蘊含著大學(xué)問。

1.怎樣查到一個特定細(xì)胞株的相關(guān)知識和培養(yǎng)條件?

ATCC(American Type Culture Collection)收集了絕大多數(shù)細(xì)胞的詳細(xì)資料。打開ATCC網(wǎng)頁的Cells and hybridomas鏈接,輸入細(xì)胞名稱就可以搜索ATCC的細(xì)胞數(shù)據(jù)庫。數(shù)據(jù)庫中有每一種細(xì)胞的詳細(xì)描述,包括細(xì)胞的來源,培養(yǎng)和凍存條件,以及相關(guān)文獻等資料。

2.如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基?

培養(yǎng)某類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件。MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞,很可能在DMEM或M199中同樣容易生長??傊?,首-選MEM、DMEM做貼壁細(xì)胞培養(yǎng);RPMI1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng);

新的細(xì)胞培養(yǎng)時要詳查資料。

3.自己新配制的液體培養(yǎng)基能保存多久?

我們建議將新配制的培養(yǎng)基放置于4℃,避光保存盡量在一周內(nèi)使用完畢,培養(yǎng)基越新鮮越好。

4.培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?

一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時,您應(yīng)該在一到兩周內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

5.培養(yǎng)基中是否須添加抗生素?

除了特殊篩選系統(tǒng)外,一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下,培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。

為防止細(xì)菌、真菌污染,可以加入青霉素-鏈霉素雙抗溶液,其培養(yǎng)基中的終濃度為青霉素100U/ml,鏈霉素為100ug/ml,但是不建議長期使用。

6.液體培養(yǎng)基可以放-20℃保存嗎?

不可以!因為在-20℃下,培養(yǎng)基中的鹽容易析出,培養(yǎng)基融化后,有的鹽可能無法重新溶解,從而導(dǎo)致培養(yǎng)基滲透壓降低,培養(yǎng)細(xì)胞時,細(xì)胞容易破裂而死亡。

7.為何培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中,顏色會偏暗紅色,且pH值越來越偏堿性?

培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中, 培養(yǎng)基內(nèi)之CO2 會逐漸溢出,造成培養(yǎng)基越來越偏堿性。而培養(yǎng)基中的酸堿指示劑(通常為phenol red) 的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果, 將造成細(xì)胞生長停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時, 可以通入無菌過濾的CO2, 以調(diào)整pH 值。

8.為什么液體培養(yǎng)基1640顏色發(fā)黃,是pH值不對嗎?

不是。因為配方原因,1640為減酚紅型,其中酚紅的濃度只有DMEM的四分之一,所以是因為酚紅濃度低,而非PH值低。

9.培養(yǎng)液pH是怎樣影響細(xì)胞生長的?

由于大多數(shù)細(xì)胞適宜PH值為7.2-7.4,偏離此范圍對細(xì)胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細(xì)胞對PH值要求也不*相同,原代細(xì)胞培養(yǎng)一般對PH值變動耐受差,無限細(xì)胞系耐受力強。

但總體來說,細(xì)胞耐酸性比耐堿性強一些,偏酸環(huán)境中更有利于細(xì)胞的生長。因此,配制培養(yǎng)用液時可把液體的PH值稍微調(diào)的偏酸一些。液體在經(jīng)過0.1um或0.2um濾膜過濾時,PH值會向上浮動0.2左右。

10.培養(yǎng)液滲透壓是怎樣影響細(xì)胞生長的?

當(dāng)細(xì)胞內(nèi)、外環(huán)境的分子濃度不同時就會產(chǎn)生滲透壓。這種情況下,水分通過滲透流入或流出細(xì)胞,從而改變細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境。

高滲透壓迫使水分從細(xì)胞中擴散出來導(dǎo)致細(xì)胞收縮,這種情況會使DNA和蛋白遭到破壞,細(xì)胞周期停滯以及終使細(xì)胞死亡;反之,低滲透壓使水分流入細(xì)胞內(nèi),使細(xì)胞腫脹破裂。

11.為什么有客戶要求培養(yǎng)基中不含酚紅?

研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用(特別是雌激素)。為避免固醇類反應(yīng),細(xì)胞培養(yǎng),尤其是哺乳類細(xì)胞時,用不加酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測時,不使用加酚紅的培養(yǎng)基。

12.酚紅的作用是什么?

酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為PH值指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。

13.干粉培養(yǎng)基里含NaHCO3嗎?

所有的干粉培養(yǎng)基中都不含NaHCO3 。

請依據(jù)說明書或包裝袋上的標(biāo)注,在干粉培養(yǎng)基*溶解后添加NaHCO3 。

14.NaHCO3的作用是什么?

與CO2一起形成緩沖系統(tǒng),保持培養(yǎng)基PH值穩(wěn)定。

15.我們實驗室培養(yǎng)箱CO2濃度一直以來都是5%,這樣可以嗎?

當(dāng)然不可以,不同的培養(yǎng)基要求添加NaHCO3的量不一樣,如DMEM要求添加3.7g/L,為了保持PH值穩(wěn)定,必須用高濃度的CO2平衡,一般不低于8%,而1640等要求添加NaHCO3 2.2g/L,還有些培養(yǎng)基要求添加更少,那么這些培養(yǎng)基就要求較低的濃度平衡,一般是5%。

16.培養(yǎng)基中丙-酮酸鈉的作用是什么?

丙-酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源,盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源,但是如果沒有葡萄糖的話,細(xì)胞也可以代謝丙-酮酸鈉。

丙-酮酸鈉的貯存液濃度一般為50mM,-20℃保存,培養(yǎng)基中的終濃度為1mM.

17.谷氨酰胺的作用是什么?

幾乎所有的細(xì)胞對谷氨酰胺都有較高的要求。谷氨酰胺脫掉氨基后,可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源,參與蛋白質(zhì)的合成和能量代謝。在缺少谷氨酰胺時,細(xì)胞生長不良而死亡。所以,各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。

谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,應(yīng)置-20℃冰凍保存,用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4度冰箱儲存兩周以上時,應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺。

18.在培養(yǎng)基中加入HEPES有何好處?

培養(yǎng)基中-常用的Buffer system是碳酸氫鹽,它可提供營養(yǎng),但卻在生理PH值條件下會降低緩沖能力。而HEPES是一種很強的Buffer,加入HEPES能使細(xì)胞培養(yǎng)基在PH7.2-7.6條件下緩沖能力增強。

Hepes的貯存液濃度一般為1M,常溫保存。培養(yǎng)基中的終濃度為25mM,即5ml 1M的Hepes加入到200ml*培養(yǎng)基中。

19.GlutaMAX-Ⅰ是什么?培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-Ⅰ?這個二肽有多穩(wěn)定?

GlutaMAX-Ⅰ是一個L-谷氨酰胺的衍生物,其不穩(wěn)定的a-氨基用L-丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽,釋放L-谷氨酰胺供利用。

GlutaMAX-Ⅰ二肽非常穩(wěn)定,即使在121℃滅菌20min, GlutaMAX-Ⅰ二肽溶液有小的降解;而在相同條件下,L-谷氨酰胺幾乎*降解。

L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時是重要的,但其在溶液中不穩(wěn)定,經(jīng)過一段時間后會降解,確切的降解率一直沒有終確定。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成,而氨對于一些細(xì)胞具有毒性。因此GlutaMAX-Ⅰ是細(xì)胞培養(yǎng)中谷氨酰胺的替代品。

20.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基?

不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同的培養(yǎng)基,細(xì)胞大多無法立即適應(yīng),造成細(xì)胞無法存活。


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