病毒RNA提取試劑盒說明書

RNApure Virus Kit

目錄號：K0586

運輸條件：室溫（15-25℃）。

保存條件：室溫（15-25℃）。

組分說明

本產品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途  

產品簡介

　　本試劑盒采用可以特異性結合病毒 RNA的吸附柱和*的緩沖液系統，適用于從

血清、血漿、尿液、腦脊液等無細胞體液及細胞培養(yǎng)上清液中分離病毒RNA。病毒

RNA特異性地結合到硅基質膜上，而污染物則流過該膜。通過兩次高效洗滌*去除

蛋白質等雜質，然后用無RNase的水或試劑盒提供的RNase-Free  Water洗脫高純度的

病毒RNA。由本試劑盒提取的病毒RNA可直接用于RT-PCR、Real-time  RT-PCR和印

跡分析等實驗。

自備試劑：無水乙醇，0.9% NaCl。

實驗前準備及重要注意事項

1．向Proteinase K中加入1.25 ml Proteinase K Storage Buffer使其溶解，-20℃保存。

   配制好的Proteinase  K勿長時間室溫放置，避免反復凍融，以免影響其活性。

2．預防RNase污染，應注意以下幾方面：

   1）使用無RNase的塑料制品和槍頭，避免交叉污染。

   2）玻璃器皿應在使用前于180℃高溫下干烤4小時，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸

   泡10分鐘，用水*沖洗后高壓滅菌。

   3）配制溶液應使用無RNase的水。

   4）操作人員戴一次性口罩和手套，實驗過程中要勤換手套。

3．血清或血漿避免反復凍融導致蛋白變性或產生沉淀，減少病毒滴度進而影響提取病

   毒核酸的產量。

4．第一次使用前應按照試劑瓶標簽的說明先在Buffer RW2中加入無水乙醇。

5．Buffer RLV如果產生沉淀，可在56℃加熱使其溶解后室溫放置。

6．所有離心步驟若無特殊說明均在室溫下進行，且所有操作步驟動作要迅速。

操作步驟

1．室溫下取200 μl血清或血漿加到1.5 ml離心管（自備）中。

   注意：不足200 μl可以加入0.9 % NaCl（客戶自備）補足。

2．向上步溶液中加入20 μl Proteinase K，混勻。

3．加入200 μl Buffer RLV，渦旋震蕩15秒。

   注意：不要直接把Proteinase K加到Buffer RLV中。

4．56℃孵育15分鐘，短暫離心，將管壁上的溶液收集到管底。

5．加入250 μl無水乙醇，渦旋震蕩15秒，室溫孵育5分鐘，短暫離心，將管壁上的溶液

   收集到管底。

6．將步驟5得溶液全部加入到已裝入收集管（Collection  Tube 2  ml）的吸附柱（Spin

   Column RS）中，若一次不能將全部溶液加入吸附柱中，請分兩次轉入，8,000 rpm

   （~6000 ×g）離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

7．向吸附柱中加入500 μl Buffer RW1，8,000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，

   將吸附柱重新放回收集管中。

8．向吸附柱中加入500 μl Buffer RW2（使用前檢查是否加入無水乙醇），8,000  rpm

   離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。

9．向吸附柱中加入500 μl無水乙醇，8,000 rpm離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將

   吸附柱重新放回收集管中。

10.12,000 rpm (~13,400×g)離心3分鐘，倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫數分

   鐘，以*晾干。

   注意：1）這一步的目的是將吸附柱中殘余乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶促反應（酶切、

   PCR等）。

   2）推薦步驟：將吸附柱放入一個新的1.5 ml離心管（自備）中，打開管蓋，56℃烘箱孵育3分鐘，

   使吸附柱的膜*干燥。

11.將吸附柱置于一個新的無RNase離心管（Collection Tube 1.5  ml）中，向吸附柱的

   中間部位懸空加入20-50 μl RNase-Free Water，室溫放置5分鐘，12,000 rpm離心

   1分鐘，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。

   注意：1）RNase-Free Water體積不應小于20 μl，體積過小影響回收率。

   2）如果要提高RNA的產量，可用20-50 μl新的RNase-Free Water重復步驟11。

   3）如果要提高RNA濃度，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，重復步驟11。

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