手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
大鼠滑膜細胞的制備方法：
滑膜細胞的培養(yǎng)：將分離的滑膜組織用含青霉素200kU/L、鏈霉素200mg/L的D-Hank's液漂洗3次以減少污染機會；去掉脂肪組織，將16個滑膜組織樣本平均分為A、B兩份。將A份不加處理分為A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8八個樣品，將B份用手術(shù)剪剪碎后分為B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8八個樣品。分別采取4種不同方法進行處理。
1)不加消化酶消化法：分別將A1、A2、B1、B2離心洗滌2次(2500r/min，離心6min)，吸棄上清液，加入100μL100%的FBS混勻，用移液槍吸出注入培養(yǎng)瓶中，放入CO2培養(yǎng)箱烘干15min，再將A1、B1加入3mL體積分數(shù)20%的FBS吹打均勻，A2、B2用少量體積分數(shù)20%的FBS人工貼壁，再加入3mL體積分數(shù)20%的FBS。
2)加Ⅱ型膠原酶消化法：將A3、A4、B3、B4離心洗滌2次(2500r/min，離心6min)，吸棄上清液，吸取膠原酶Ⅱ至離心管中，輕輕吹打使組織塊重新懸浮，移入培養(yǎng)瓶，放入CO2培養(yǎng)箱消化，觀察組織成絮狀后，加入1mL體積分數(shù)20%FBS終止消化，用移液槍吸出，移入離心管離心(2500r/min，離心6min)，棄上清液，放入培養(yǎng)瓶中，A3、B3加入3mL體積分數(shù)20%FBS，吹打均勻；A4、B4用少量體積分數(shù)20%的FBS人工貼壁，再加入3mL體積分數(shù)20%的FBS。
3)加胰蛋白酶消化法：將A5、A6、B5、B6離心洗滌2次(2500r/min，離心6min)，吸棄上清液，吸取胰蛋白酶至離心管中，輕輕吹打使組織塊重新懸浮，移入培養(yǎng)瓶，放入CO2培養(yǎng)箱消化，觀察組織成絮狀后，加入體積分數(shù)20%FBS終止消化，用移液槍吸出，移入離心管離心(2500r/min，離心6min)。棄上清液，放入培養(yǎng)瓶中，A5、B5加入3mL體積分數(shù)20%FBS，吹打均勻；A6、B6用少量體積分數(shù)20%的FBS人工貼壁，再加入3mL體積分數(shù)20%的FBS。
4)先加Ⅱ型膠原酶消化法再加胰蛋白酶消化：將A7、A8、B7、B8離心洗滌2次(2500r/min，離心6min)，吸棄上清液，吸取膠原酶Ⅱ至離心管中，輕輕吹打使組織塊重新懸浮，移入培養(yǎng)瓶，放入CO2培養(yǎng)箱消化，觀察組織成絮狀后，取出培養(yǎng)瓶，仔細吹打使組織塊分散，將未黏附細胞移入離心管離心(2500r/min，離心6min)，棄上清液，再加D-Hank's液洗滌，離心，吸棄洗滌液，重復(fù)離心3次，吸取胰蛋白酶至離心管中，輕輕吹打使組織塊重新懸浮，移入培養(yǎng)瓶，放入CO2培養(yǎng)箱消化，消化結(jié)束取出培養(yǎng)瓶，加入體積分數(shù)20%FBS終止消化，用移液槍吸出，移入離心管離心(2500r/min，離心6min)。棄上清液，放入培養(yǎng)瓶中，A7、B7加入3mL體積分數(shù)20%FBS，吹打均勻；A8、B8用少量體積分數(shù)20%的FBS人工貼壁，再加入3mL體積分數(shù)20%的FBS。
5)結(jié)果：培養(yǎng)9d后，觀察各培養(yǎng)瓶中細胞的成活個數(shù)和生長狀況，組織剪碎不加消化酶人工貼壁培養(yǎng)的細胞得數(shù)為2.03×106，是所有培養(yǎng)方法中細胞的數(shù)最多的。細胞活力為95%，與組織剪碎加膠原酶Ⅱ消化后人工貼壁培養(yǎng)同為各種培養(yǎng)方法中細胞活力*強的，綜合考慮*方法為組織剪碎不加消化酶人工貼壁培養(yǎng)。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心