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首先，先讓我們一起來(lái)看看熒光顯微成像技術(shù)的發(fā)展，所謂熒光，指的是當(dāng)分子受到光激發(fā)時(shí)，電子從基態(tài)躍遷到不穩(wěn)定狀態(tài)的激發(fā)態(tài)，電子從第一激發(fā)單重態(tài)的低振動(dòng)能級(jí)回到基態(tài)并發(fā)出輻射的光，一般而言，熒光光譜主要包括兩種，一種是激發(fā)譜，而另外一種則是發(fā)射譜，其中激發(fā)譜是熒光物質(zhì)在不同波長(zhǎng)的激發(fā)光作用下測(cè)得的某一波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度的變化情況，即不同波長(zhǎng)的激發(fā)光的相對(duì)效率，而發(fā)射譜是某一固定波長(zhǎng)的激發(fā)光作用下熒光強(qiáng)度在不同波長(zhǎng)處的分布情況，即熒光中不同波長(zhǎng)的光成分的相對(duì)強(qiáng)度。
受到光激發(fā)的分子，電子從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，電子在吸收光的能量后，可能到達(dá)第一激發(fā)態(tài)的高振動(dòng)能級(jí)或第二激發(fā)態(tài)，這個(gè)時(shí)候電子會(huì)經(jīng)歷內(nèi)轉(zhuǎn)換或馳豫振蕩過(guò)程到達(dá)第一激發(fā)態(tài)的低振動(dòng)能級(jí)。由于激發(fā)態(tài)是不穩(wěn)定狀態(tài)，電子從第一激發(fā)單重態(tài)的低振動(dòng)能級(jí)回到基態(tài)并發(fā)出輻射。
熒光顯微鏡是由光源、濾板系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)等主要部件組成，是利用一定波長(zhǎng)的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光，通過(guò)物鏡和目鏡系統(tǒng)放大以觀察標(biāo)本的熒光圖像。
以徠卡熒光顯微鏡為例，熒光顯微鏡也是光學(xué)顯微鏡的一種，主要區(qū)別是二者的激發(fā)波長(zhǎng)不同，由此決定了熒光顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡結(jié)構(gòu)和使用方法上的不同。
1、照明方式通常為落射式，即光源通過(guò)物鏡投射于樣品上；
2、光源為紫外光，波長(zhǎng)較短，分辨力率高于普通顯微鏡；
3、有兩個(gè)特殊的濾光片，光源前的用以濾除可見(jiàn)光，目鏡和物鏡之間的用于濾除紫外線，用以保護(hù)人眼。
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