在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,也經(jīng)常會對細(xì)胞進(jìn)行凍存操作。細(xì)胞凍存通常是指將細(xì)胞放在低溫環(huán)境,減少細(xì)胞代謝,以便長期儲存的一種技術(shù)。細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。
細(xì)胞凍存液,作為細(xì)胞凍存時必須使用的一種溶液,不僅僅是說只是用來進(jìn)行細(xì)胞的保存,在細(xì)胞的購買、寄贈、交換和運送過程中也起著關(guān)鍵作用,因此選擇一款好的細(xì)胞凍存液就尤為重要。
如果不加任何條件直接凍存細(xì)胞,細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會形成冰晶,能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、pH值改變、蛋白變性等,從而引起細(xì)胞死亡。而細(xì)胞凍存液就相當(dāng)于細(xì)胞的保護(hù)劑,在凍存細(xì)胞時將細(xì)胞懸浮于凍存液中,可使冰點降低,提高細(xì)胞膜對水的通透性,在緩慢的凍結(jié)條件下,能使細(xì)胞內(nèi)水份在凍結(jié)前透出細(xì)胞,可以防止或減少冷凍冰晶對細(xì)胞的損傷作用。這樣就使細(xì)胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,在需要時直接復(fù)蘇就可恢復(fù)細(xì)胞活性。
傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液
傳統(tǒng)的細(xì)胞凍存液是使用培養(yǎng)基、血清和DMSO按照一定的比例混合,其中DMSO的含量是10%,血清的含量是10%,統(tǒng)稱為含血清細(xì)胞凍存液。
含血清細(xì)胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法,
如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,然后移至-20℃冰箱30分鐘,再移至-80℃冰箱保存16-18個小時(或隔夜),最后才移至液氮罐中進(jìn)行長期的儲存。
(其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個小時,以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量的死亡。)
無血清細(xì)胞凍存液
無血清細(xì)胞凍存液,不含血清,含DMSO、葡萄糖等各種細(xì)胞營養(yǎng)成分、pH調(diào)節(jié)劑等成分。不含動物來源性蛋白,能減少各類病毒、霉菌和支原體等污染,確保凍存細(xì)胞安全。通用于各種動物細(xì)胞株。2-8℃即可穩(wěn)定保存,無需冷凍,即取即用。凍存細(xì)胞,無需程序降溫。凍存細(xì)胞復(fù)蘇率在90%以上。
用途
1.無血清細(xì)胞凍存液用于造血干細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞等干細(xì)胞的儲存。
2.無血清細(xì)胞凍存液用于T淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的存儲。
3.無血清細(xì)胞凍存液用于其他類型哺乳動物細(xì)胞的儲存。
產(chǎn)品性能
1.不含牛血清,無動物源組分。
傳統(tǒng)的凍存液,一般由胎牛血清、DMSO等組分組成。胎牛血清取自牛,因此,難以應(yīng)用到需要避免接觸動物源的應(yīng)用領(lǐng)域。用包括人白蛋白等蛋白組分替代血清的用途,無動物源組分。
2.2-8℃即可穩(wěn)定保存,無需冷凍,即取即用。
為了避免反復(fù)凍融,傳統(tǒng)的細(xì)胞凍存液,需要分裝成小管后置于-20℃環(huán)境下保存。細(xì)胞沉淀加無血清細(xì)胞凍存液,直接放入-80℃長期儲存即可,無需再進(jìn)行分裝。
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