傳代時間一般通過兩個方面進(jìn)行確定：一是在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，當(dāng)培養(yǎng)液由于 ph值下降而呈現(xiàn)黃色時，表明細(xì)胞已經(jīng)達(dá)到最大密度，需要換液或進(jìn)行傳代培養(yǎng)；二是觀察細(xì)胞形態(tài)，健康細(xì)胞形態(tài)飽滿，折光性好，生長致密時即可傳代。初代培養(yǎng)的初次傳代很重要，是建立細(xì)胞系的關(guān)鍵時期。在初次傳代時一般要特別注意以下3點(diǎn)：

①細(xì)胞沒有生長到足以覆蓋瓶底壁的大部分表面之前，不要急于傳代。

②原代培養(yǎng)時細(xì)胞多為混雜生長，上皮樣細(xì)胞和成纖維樣細(xì)胞并存的情況很常見。傳代時不同的細(xì)胞有不同的消化時間，因此要根據(jù)需要，注意觀察及時進(jìn)行處理，并可根據(jù)不同細(xì)胞對胰蛋白酶的耐受時間不同而分離和純化所需要的細(xì)胞。另外早期傳代的培養(yǎng)細(xì)胞較已經(jīng)建系的培養(yǎng)消化時間相對較長。吹打細(xì)胞時動作要輕巧，盡可能減少對細(xì)胞的損傷。

③初次傳代時細(xì)胞接種數(shù)量要多一些，使細(xì)胞能盡快適應(yīng)新環(huán)境有利于細(xì)胞生存和增殖。隨消化分離而脫落的組織塊也可一并傳入新的培養(yǎng)瓶。

體外培養(yǎng)技術(shù)中所謂的傳“代”概念并不等于細(xì)胞生物學(xué)中“親代細(xì)胞”與“子代細(xì)胞”中“代”的概念。傳代培養(yǎng)的實(shí)質(zhì)就是分離后再次培養(yǎng)，進(jìn)行一次分離再培養(yǎng)稱之為傳一代，傳代數(shù)可以衡量培養(yǎng)物的培養(yǎng)年齡。

傳代是細(xì)胞分裂造成的結(jié)果，細(xì)胞從一次分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個細(xì)胞周期，分為間期與分裂期兩個階段。細(xì)胞周期能準(zhǔn)確表示細(xì)胞增殖速度。兩次細(xì)胞分裂之間的時間也可以用細(xì)胞世代時間來表示，所以細(xì)胞周期指細(xì)胞一個世代所經(jīng)歷的時間。正常細(xì)胞培養(yǎng)的世代數(shù)有限，只有癌細(xì)胞和發(fā)生轉(zhuǎn)化的細(xì)胞才能無限生長下去。

傳代代數(shù)與細(xì)胞的世代數(shù)（增殖代數(shù)）并不是同一個概念。在細(xì)胞培養(yǎng)時，所說的“第6代細(xì)胞”指細(xì)胞已經(jīng)傳代6次。以貼壁細(xì)胞為例，每傳代一次，大概要倍增3~6次，細(xì)胞要經(jīng)歷如下生長過程：游離期、貼壁期、潛伏期、對數(shù)生長期和停止期（平臺期）。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到平臺期時，就要進(jìn)行傳代培養(yǎng)，否則細(xì)胞會中毒，發(fā)生形態(tài)改變，甚至死亡。

培養(yǎng)細(xì)胞有密度依賴和接觸抑制的特點(diǎn)，細(xì)胞濃度過低，不易存活，表現(xiàn)為細(xì)胞在達(dá)到增長前有較長的滯留期；細(xì)胞濃度過高，發(fā)生接觸抑制后生長遲緩甚至死亡，所以傳代比例通常按1:2~1:4的稀釋度進(jìn)行。傳代后細(xì)胞的接種濃度一般為5x105個/mL。

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