01 新guan研究病理評估

● HALO數(shù)字病理圖像分析平臺

數(shù)字病理作為理解新*疾病的工具之一，在描述病毒攻擊人體的機制，理解免疫系統(tǒng)對疾病做出反應(yīng)，以及指導(dǎo)治療和影響患者預(yù)后至關(guān)重要。

HALO是數(shù)字病理圖像分析的優(yōu)秀者，在新*的發(fā)病機制、疫苗、患者的治療及預(yù)后等研究的重要工中，將會成為您*的研究助手。HALO數(shù)字病理圖像分析平臺結(jié)合HALO-Link圖像管理平臺，可極大的滿足您對組織圖像的查看、注釋、分析、管理、共享等需求。
 
Indica Labs 于2020年5月份和美國國立衛(wèi)生研究院（National Institutes of Health）合作啟動了在線的新*數(shù)字病理學(xué)資料庫（COVID-DPR），用以托管高分辨率的新*相關(guān)的人體組織數(shù)字圖像。

應(yīng)用文獻概覽:

（1）HALO在SARS-CoV-2疫苗研究中的應(yīng)用

倉鼠大劑量鼻內(nèi)SARS-CoV-2感染會導(dǎo)致嚴(yán)重的臨床疾病，包括組織中病毒復(fù)制水平高、嚴(yán)重的肺炎、體重減輕和部分動物死亡。

表達(dá)穩(wěn)定型SARS-CoV-2突刺蛋白的腺病毒血清型26載體疫苗的單次免疫可引起結(jié)合和中和抗體反應(yīng)，并防止SARS-CoV-2引起的體重減輕、肺炎和死亡。

這些數(shù)據(jù)證明了針對SARS-CoV-2臨床疾病的疫苗保護作用。該模型可用于SARS-CoV-2疫苗的臨床前研究、治療方法和發(fā)病機理。

·  文中涉及的HALO病理圖像分析：
在每只動物至少一個肺葉的橫截面上，使用HALO定量平臺進行分析。在有多個橫截面的情況下，每個肺葉被量化為一個單獨的數(shù)據(jù)點。

使用Multiplex IHC算法對表達(dá)SARS-CoV-N和Iba-1蛋白的陽性細(xì)胞和百分比進行定量分析。對于SARS-CoV-2 RNAscope ISH和Mx1，使用Area Quantification（面積定量模塊）確定SARS-CoV-2反義或正義探針的表達(dá)量及Mx1蛋白占總組織面積的百分比。

對于MPO(中性粒細(xì)胞)和CD3+細(xì)胞定量，剔除血管 (>5 mm2), 支氣管、細(xì)支氣管、軟骨和結(jié)締組織區(qū)域，并使用CytoNuclear模塊對MPO+及CD3+細(xì)胞進行定量分析并計算其細(xì)胞密度。

 在所有的定量分析中，對每個樣本的所有圖像均進行人工復(fù)核，以確保標(biāo)注及定量分析的準(zhǔn)確性。

Reference：
Tostanoski, L.H., Wegmann, F., Martinot, A.J. et al. Ad26 vaccine protects against SARS-CoV-2 severe clinical disease in hamsters. Nat Med (2020). .

（2）HALO在SARS-COV-2感染后的免疫事件研究中的應(yīng)用

該研究對SARS-COV-2感染后的免疫事件進行了調(diào)查，從急性炎癥狀態(tài)到感染后4周，非人類靈長類動物(NHP)的肺部病理具有異質(zhì)性。急性期的特征是CD16+單核細(xì)胞從血液中快速遷移，同時肺中CD16+巨噬細(xì)胞增多。

研究中確定了兩個間質(zhì)巨噬細(xì)胞亞群(DR+ CD206-)，一個與血漿中IL-6水平直接相關(guān)的過渡性CD11c+ CD16+群體，以及一個長期存在的CD11b+ CD16+群體。研究結(jié)果揭示了新guan的細(xì)胞機制，并驗證了NHP作為免疫療法測試模型的有效性。

文中涉及的HALO病理圖像分析：

使用HALO軟件對病理病變進行定量分析。HALO Tissue Classifier 用于識別肺部RM和AGM區(qū)域的fluidic和cellular炎癥。根據(jù)肺部受累的比例，分別對fluidic和cellular炎癥進行評分。
 
Reference：
Fahlberg, M.D., Blair, R.V., Doyle-Meyers, L.A. et al. Cellular events of acute, resolving or progressive 新guanin SARS-CoV-2 infected non-human primates.

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02 新guan疫苗免疫學(xué)應(yīng)答評價

●   AID酶聯(lián)斑點分析儀-ELISPOT

· 德國艾迪（AID）與ELISPOT
 德國艾迪（AID）是一家專業(yè)研發(fā)并生產(chǎn)酶聯(lián)斑點分析儀，細(xì)胞分析儀，病毒噬斑分析儀，菌落分析儀，Elispot酶聯(lián)斑點分析試劑，PCR診斷試劑的公司。
•ELISPOT是檢測和評價疫苗的細(xì)胞免疫水平的有效方法。
•*標(biāo)準(zhǔn)：國際上普遍采用ELISPOT方法監(jiān)測HIV疫苗研究中的免疫應(yīng)答反應(yīng)，在國際艾滋病疫苗行動計劃中，采用ELISPOT法對T細(xì)胞功能進行評價。

· ELISPOT在疫苗研發(fā)中的應(yīng)用
（1）疫苗研發(fā)和動物實驗
  ·抗原表位篩選
  ·免疫效果評價
  ·疫苗的細(xì)胞免疫效果評價

（2）疫苗臨床試驗
  ·評價疫苗抗原的免疫應(yīng)答

（3）疫苗生產(chǎn)過程中的質(zhì)控
  ·鑒定疫苗的免疫效果是否一致穩(wěn)定

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03 新guan疫苗檢測蛋白分析

● MSD電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)

MSD在疫苗檢測應(yīng)用：

· 異源初免打破新疫苗的保護性免疫反應(yīng)瓶頸
來自不同平臺的新guan疫苗在療效、保護期和副作用方面存在差異。為了最大限度地發(fā)揮疫苗接種的效益，科研攻關(guān)組疫苗研發(fā)專班專家組副組長、中國工程院院士王軍志研究團隊探索了采用異源的主要增強策略的效用，在小鼠模型中對中國正在進行臨床試驗的四種主要新guan候選疫苗的不同組合進行了測試。
 
結(jié)果表明，腺病毒載體疫苗免疫后，滅活/重組亞單位/mRNA疫苗再免疫，特別能提高水平的中和抗體，并促進調(diào)節(jié)抗體反應(yīng)為主要的中和抗體。此外，腺病毒載體疫苗的異源初始增強方案也改善了Th1偏向性T細(xì)胞反應(yīng)。研究結(jié)果為研制和應(yīng)用新guan疫苗控制SARS-CoV-2大流行提供了新的思路。

中國國家食品藥品監(jiān)督管理研究院提供并維持無特異性病原體BALB/c小鼠。本研究中使用的四種SARS-CoV-2疫苗包括滅活疫苗、腺病毒載體疫苗、重組蛋白疫苗和mRNA疫苗，并由不同制造商捐贈。

新鮮分離的脾細(xì)胞用跨越SARS CoV-2棘突蛋白的四個肽池以每孔2 × 105個細(xì)胞刺激20小時。每種肽的濃度為5μg/mL。收集上清液并根據(jù)不同的疫苗接種組或不同的肽池匯集。上清液按1:2的比例稀釋，然后使用MSD V-PLEX促炎試劑盒1（MSD 試劑盒：V-PLEX Proinflammatory Panel 1 Mouse Kit）進行測量。使用標(biāo)準(zhǔn)曲線計算每個樣品的濃度。從刺激樣品的水平中減去未刺激樣品的濃度。

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04 新guan研究單細(xì)胞測序基因分析

● BD Rhapsody 單細(xì)胞多組學(xué)平臺

應(yīng)用單細(xì)胞測序探究新guan患者單核細(xì)胞免疫學(xué)特征

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