流式細胞術(shù)是當(dāng)代細胞分析技術(shù)之一，包括細胞計數(shù)、細胞內(nèi)/外抗原分子檢測、細胞中DNA和RNA的倍體分析、細胞的生物學(xué)特性及功能分析等。

對于流式細胞分析而言，樣本制備的好壞對最終的檢測結(jié)果有很大的影響。在免疫學(xué)和血液學(xué)中，應(yīng)用流式細胞術(shù)分析的樣本多為外周血、骨髓、各類體液（如腦脊液、胸水、腹水）以及人體的組織（如淋巴結(jié)、脾、肝等），這幾種樣本要如何制備和保存呢？

外周血/骨髓

1. 保存方法

收集樣本后置于加有抗凝劑（一般選擇肝素或EDTA）的試管中，室溫保存，盡量在12 h內(nèi)處理樣本；若無法及時處理，4℃保存，此時最好選擇肝素抗凝管。

2. 處理方法

一般不需要特殊處理制備單細胞懸液，所用試劑為淋巴細胞分離液和紅細胞裂解液。但在臨床檢測中，為了避免細胞成分丟失，通常不推薦使用淋巴細胞分離液分離單核細胞。

3. 抗凝劑的選擇

血液標(biāo)本可以使用EDTA、ACD（枸櫞酸葡萄糖）或肝素抗凝。

一般認為，ACD和肝素抗凝的樣本72 h內(nèi)細胞是穩(wěn)定的；EDTA抗凝48 h內(nèi)是穩(wěn)定的。

EDTA適用于白細胞的免疫表型分析，可防止成熟的髓系細胞貼壁造成細胞損失，并具有較強的抗血小板凝集能力，但對細胞活性的保持不如肝素抗凝。同時EDTA是二價陽離子的強螯合劑，會影響與Ca2+相關(guān)的抗原位點（如CD11b等），并會抑制與Ca2+ 相關(guān)的細胞功能。肝素常用于白細胞功能研究，可維持Ca2+和Mg2+在細胞內(nèi)的生理濃度，更好保持細胞活性，適用于放置時間較長、不能及時檢測的樣本，但不適合血小板的相關(guān)檢測。

骨髓樣本優(yōu)先選擇肝素抗凝。

體液

1. 保存方法

收集樣本后置于肝素抗凝管中，室溫保存，且盡量在12 h內(nèi)處理樣本。若無法及時處理，則4℃保存，時間最好不超過48 h。

2. 處理方法

3. 樣本1000-1500 rpm離心5 min，棄去上清；

4. 加入含有0.1%牛血清白蛋白的磷酸鹽緩沖液（PBS），離心洗滌5 min；

5. 加入適量PBS重懸。如有細小沉淀，用300目尼龍網(wǎng)過濾后備用。

組織