尺寸排阻色譜柱由親水性球形聚甲基丙烯酸酯顆粒填充,主要針對(duì)小分子蛋白、蛋白片段、多肽、寡核苷酸的分離分析。
特點(diǎn):
1.保留時(shí)間是分子尺寸的函數(shù),有可能提供分子結(jié)構(gòu)的某些信息。2.保留時(shí)間短,譜峰窄,易檢測(cè),可采用靈敏度較低的檢測(cè)器。
3.固定相與分子間作用力極弱,趨于零。由于,柱子不能很強(qiáng)保留分子因此柱壽命長(zhǎng)。
4.不能分辨分子大小相近的化合物,相對(duì)分子質(zhì)量差別必須大于10%能得以分離。
5.大分子的流程短,移動(dòng)速度快,先流出色譜柱;小分子的流程長(zhǎng),移動(dòng)速度慢,后流出色柱;而中等分子居兩者之間。
6.生物相容性好,有很高的活性回收率。
流動(dòng)相的選擇:
排阻色譜所選用的流動(dòng)相必須能溶解樣品,并必須與凝膠本身非常相似,這樣才能潤(rùn)濕凝膠。當(dāng)采用軟性凝膠時(shí),溶劑也必須能溶脹凝膠。溶劑的粘度要小,因?yàn)楦哒扯热軇┩拗品肿訑U(kuò)散作用而影響分離效果。
尺寸排阻色譜柱的保存:
日常使用中,建議保存在150mM磷酸鹽緩沖液中(pH7.0)。如長(zhǎng)期不用時(shí),可將色譜柱保存至20%乙醇中,以防止菌體污染。(注:可根據(jù)具體使用條件選擇保存方式,如實(shí)驗(yàn)條件為緩
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