柱外體積（ECV）是指色譜系統(tǒng)從進(jìn)樣器到檢測(cè)器這段管路除去色譜柱的總體積。大部分新的高效液相色譜系統(tǒng)都經(jīng)過(guò)了優(yōu)化，因此，可以使用高效的核殼顆粒（SPP）色譜柱，例如HALO。

     現(xiàn)在讓我們簡(jiǎn)單概述一下高效液相色譜系統(tǒng)。一個(gè)典型的HPLC系統(tǒng)由脫氣機(jī)、泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱和檢測(cè)器。我們可以仔細(xì)看一下里面。

     柱外體積通常來(lái)自進(jìn)樣器，包括進(jìn)樣器本身、連接進(jìn)樣器與色譜柱的管路以及連接色譜柱與檢測(cè)器的管路、檢測(cè)器流通池、熱交換器以及各個(gè)連接配件所產(chǎn)生的任何體積。

     但是有很多舊的色譜儀仍在使用。舊的色譜儀使用顆粒更大、長(zhǎng)度更長(zhǎng)的色譜柱，因此進(jìn)樣器和管路的柱外體積對(duì)分離度和峰寬的影響比較小。在切換到更短的SPP色譜柱時(shí)，需要減少柱外體積，以避免峰值展寬，從而降低分離度以及定量結(jié)果的準(zhǔn)確度。

     為了使色譜柱獲得良好的性能，應(yīng)該盡量減少柱外體積，以獲得色譜柱的最佳分離。通常，需要將柱外體積降至總峰值體積的一半以下，以獲得色譜柱最大分離效果。

示  例

     讓我們來(lái)看一個(gè)例子。下圖展示了2μm 3.0×150mm HALO色譜柱在標(biāo)準(zhǔn)HPLC系統(tǒng)和UHPLC系統(tǒng)的等度分離性能對(duì)比。本例中，標(biāo)準(zhǔn)HPLC的柱外體積是64μl，UHPLC的柱外體積是16μl。在標(biāo)準(zhǔn)HPLC中，超快速的HALO色譜柱分析時(shí)間略長(zhǎng)，且由于峰展寬，塔板數(shù)更低。此外，分離度比HALO色譜柱預(yù)計(jì)的要低。在轉(zhuǎn)移至具有更低柱外體積的UHPLC時(shí)，HALO色譜柱提供了更快速更高分離度的分離。

     第四，使用體積更小，長(zhǎng)度更短的管路。

     第五，使用更小的流通池。