在分離度方程式中有三個(gè)變量:柱效(N)、選擇性(α)及保留因子(K)。我們可以看出,選擇性(α)是調(diào)整和提高分離度有效的參數(shù)。
同時(shí),色譜柱固定相是調(diào)整HPLC選擇性(見表B)中四個(gè)有效的參數(shù)之一。當(dāng)然,對于離子化分析物,流動(dòng)相pH是有效的調(diào)節(jié)參數(shù)。此外,與色譜柱固定相同樣重要的還有流動(dòng)相中有機(jī)溶劑(乙腈 vs 甲醇)的選擇、及有機(jī)溶劑含量/梯度斜率等等。
在開發(fā)一個(gè)色譜分析方法時(shí),可以有多種方式來實(shí)現(xiàn)特定的分離和保留需求。一種是采取系統(tǒng)篩選多個(gè)固定相的方式,針對不同的分析,HALO®有不同的固定相。用于小分子反相分離的HALO®固定相請見表C,固定相排序方式是根據(jù)pH 2.8和pH 7條件下與HALO® C18的選擇性差異而定的。例如,如果您在尋找一支低pH條件下與HALO® C18不同選擇性的色譜柱,您可以在表C中選擇HALO® PFP,因?yàn)檫@種固定相最有可能與C18正交。當(dāng)然,其他的 HALO®固定相例如Phenyl-Hexyl、ES-CN、Biphenyl、RP-Amide等等,因其與HALO® C18、HALO® C8、HALO® AQ-C18保留機(jī)理之差異,也可以作為進(jìn)行系統(tǒng)篩選的色譜柱之一或者一部分(圖L)。另一種方法是通過對類似固定相的反復(fù)試驗(yàn)來達(dá)到。以HALO® C18 和 HALO® AQ-C18為例,由表C可知,這兩個(gè)固定相之間不具備正交性,但HALO® AQ-C18的極性特點(diǎn)可能恰好是分析極性化合物所需要的。


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