另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光，熒光顯微鏡就是對這類物質(zhì)進行定性和定量研究的工具之一。

　　下面讓我們一起來了解一下生物熒光顯微鏡的使用方法及注意事項吧。

　　一、使用方法

　　(1)打開燈源，超高壓汞燈要預(yù)熱15min才能達到最亮點。

　　(2)透射式熒光顯微鏡需在光源與暗視野聚光器之間裝上所要求的激發(fā)濾片，在物鏡的后面裝上相應(yīng)的壓制濾片。落射式熒光顯微鏡需在光路的插槽中插入所要求的激發(fā)濾片、雙色束分離器、壓制濾片的插塊。

　　(3)用低倍鏡觀察，根據(jù)不同型號熒光顯微鏡的調(diào)節(jié)裝置，調(diào)整光源中心，使其位于整個照明光斑的中央。

　　(4)放置標本片，調(diào)焦后即可觀察。使用中應(yīng)注意:未裝濾光片不要用眼直接觀察，以免引起眼的損傷;用油鏡觀察標本時，必須用無熒光的特殊鏡油;高壓汞燈關(guān)閉后不能立即重新打開，需待汞燈*冷卻后才能再啟動，否則會不穩(wěn)定，影響汞燈壽命。

　　(5)觀察。例如:在熒光顯微鏡下用藍紫光濾光片，觀察到經(jīng)0.01%吖啶橙熒光染料染色的細胞，細胞核和細胞質(zhì)被激發(fā)產(chǎn)生兩種不同顏色的熒光(暗綠色和橙紅色)。

　　二、注意事項

　　(1)嚴格按照熒光顯微鏡出廠說明書要求進行操作，不要隨意改變程序。

　　(2)應(yīng)在暗室中進行檢查。進入暗室后，接上電源，點燃超高壓汞燈5~15min，待光源發(fā)出強光穩(wěn)定后，眼睛*適應(yīng)暗室，再開始觀察標本。

　　(3)防止紫外線對眼睛的損害，在調(diào)整光源時應(yīng)戴上防護眼鏡。

　　(4)檢查時間每次以1~2h為宜，超過90min，超高壓汞燈發(fā)光強度逐漸下降，熒光減弱;標本受紫外線照射3~5min后，熒光也明顯減弱;所以，最多不得超過2~3h。

　　(5)熒光顯微鏡光源壽命有限，標本應(yīng)集中檢查，以節(jié)省時間，保護光源。天熱時，應(yīng)加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應(yīng)從開始就記錄使用時間。燈熄滅后欲再用時，須待燈泡充分冷卻后才能點燃。一天中應(yīng)避免數(shù)次點燃光源。

　　(6)標本染色后立即觀察，因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時間，防止封裱劑蒸發(fā)。長時間的激發(fā)光照射標本，會使得熒光衰減和消失現(xiàn)象，故應(yīng)盡可能縮短照射時間。暫時不觀察時可用擋光板遮蓋激發(fā)光。

　　(7)標本觀察時候應(yīng)采用無熒光油，應(yīng)避免眼睛直視紫外光源。

　　(8)電源應(yīng)安裝穩(wěn)壓器，電壓不穩(wěn)會降低熒光燈的壽命。

　　熒光顯微鏡與光學顯微鏡的區(qū)別

　　熒光顯微鏡和普通顯微鏡有以下的區(qū)別:

　　1.照明方式通常為落射式，即光源通過物鏡投射于樣品上;

　　2.光源為紫外光，波長較短，分辨力高于普通顯微鏡;

　　3.有兩個特殊的濾光片，光源前的用以濾除可見光，目鏡和物鏡之間的用于濾除紫外線，用以保護人目。

　　熒光顯微鏡也是光學顯微鏡的一種，主要的區(qū)別是二者的激發(fā)波長不同。由此決定了熒光顯微鏡與普通光學顯微鏡結(jié)構(gòu)和使用方法上的不同。

　　熒光顯微鏡是免疫熒光細胞化學的基本工具。它是由光源、濾板系統(tǒng)和光學系統(tǒng)等主要部件組成。是利用一定波長的光激發(fā)標本發(fā)射熒光，通過物鏡和目鏡系統(tǒng)放大以觀察標本的熒光圖像。