在培養(yǎng)細胞過程中，同學們最擔心的就是細胞污染。因此，今天給大家分享如何辨別細胞污染的經(jīng)驗，趕快學起來吧~

一、肉眼觀察

把培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿拿起來，對者光線檢查

●渾濁情況：即使細胞密度很高，培養(yǎng)基也應該是透明的。輕輕移動或晃動培養(yǎng)瓶，觀察培養(yǎng)基的渾濁或懸浮情況，一些霉菌可能會在培養(yǎng)基的表面形成菌落。

●培養(yǎng)基顏色的變化。酸性條件下，加了酚紅的培養(yǎng)基會由紅變黃，而堿性條件下會變成紅紫色。細菌污染常常會使培養(yǎng)基變成黃色，真菌污染會使培養(yǎng)基變成深紫紅色。

注意：丟掉細胞以前要仔細檢查一下，快速生長和生長過量的細胞培養(yǎng)基也會變黃。當培養(yǎng)箱中CO2的濃度變化時培養(yǎng)基的顏色也會變成黃色（CO2濃度太高）或是粉紅色（CO2 濃度太低）。

●聞！當然不能打開瓶子去聞，把鼻子貼在瓶口聞，許多污染發(fā)生以后都會散發(fā)出易察覺的、特殊的氣味，甚至打開培養(yǎng)箱門就聞到了。

二、顯微觀察

在倒置顯微鏡下，先用低倍（10x）再用高倍（40x）物鏡（總放大倍數(shù)為400）觀察細胞培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中的細胞：

●其他有機體：在低倍鏡下，真菌的菌絲體成長棒狀，并橫穿整個視野，還可以觀察到酵母，有時呈小圓球形，有時還有芽。

在高倍鏡下可以觀察到細菌，它們可能是棒狀或球狀，單獨成鏈或成團存在，它們也可能和細胞混在一起，并且明顯處于細胞內部，有些細胞可能已經(jīng)裂解變得模糊。觀察時可能每兩個視野才出現(xiàn)一個污染（當然也算被污染了！），而且可能污染物是可以運動的。

●損傷細胞：感染會殺死細胞，可能導致每個細胞都裂解/細胞層從附著物上全剝離，更可能的是細胞變得不規(guī)則（或大或小），在低倍鏡下是黑色的粒狀。

（1）懸浮細胞

懸浮培養(yǎng)細胞比貼壁培養(yǎng)細胞更加難以顯微觀察，尤其是高倍顯微鏡下。

●將培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿放在顯微鏡的載物臺上，靜置一會。將焦距對準器皿的底部，觀察那些輕微附著的細胞，因為它們可能已經(jīng)接觸到了微生物。

●對準整個培養(yǎng)瓶焦距， 當發(fā)現(xiàn)細胞的時候，用細聚焦調節(jié)旋鈕調節(jié)，仔細檢查周圍的培養(yǎng)基有沒有污染發(fā)生。

（2）貼壁細胞

三、制片觀察法

如果你不能確定是否發(fā)生了污染

●制作濕涂片或染色片：取1 ml培養(yǎng)基離心，用50μl培養(yǎng)基或緩沖液重新懸浮細胞，滴一滴到載玻片，蓋上蓋玻片制成濕涂片；或涂片、固定并染色（甲基蘭或革蘭氏染液），在高倍鏡下觀察。

●將細胞在營養(yǎng)培養(yǎng)基或血瓊脂培養(yǎng)基上劃線，37℃培養(yǎng)3天。如果有菌落，那么細胞被污染了。

●取1 ml的細胞培養(yǎng)液至無菌的微量離心管中，37℃培養(yǎng)3天。觀察到渾濁物，做濕涂片顯微鏡觀察。

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