前列腺癌是quan球男性zui常見的癌癥之一。早期、低級別的癌癥可以通過手術或放射成功治療。對于患有前列腺以外的高級別腫瘤的患者，標準治療與雄激素治療相結合。雄激素消融阻斷前列腺腫瘤賴以生長和存活的男性激素，最初是有效的；然而，在沒有雄激素的情況下，前列腺癌會再次生長，并發(fā)展為更具侵襲性的形式，稱為去勢抵抗型前列腺癌（CRPC）?？谷萸傲邢侔┗颊卟豢杀苊獾貢剐奂に丿煼óa(chǎn)生耐藥性，部分原因是雄激素受體（AR）突變或剪接變體能夠恢復AR信號。

上海奕拓生物和上海Chinese Academy of Sciences生物與化學交叉研究中心朱繼東/朱光亞團隊合作的研究顯示配體活化的AR可以形成轉錄活性的聚合物。AR的結構化和非結構化區(qū)域都有助于AR的有效相分離，無序N端起主要作用。AR液-液相分離行為具有轉錄活性和抗雄激素功效。抗雄激素可以以配體獨立的方式促進AR抗性突變體的相分離和轉錄活性。該研究進行了基于相分離的表型篩選，并鑒定了ET516分子，ET516特異性破壞AR聚合物，有效抑制AR轉錄活性，并抑制表達AR抗性突變體的前列腺癌細胞的增殖和腫瘤生長。研究的結果表明液-液相分離是一種新的耐藥機制，并表明靶向相分離可能為藥物發(fā)現(xiàn)提供一種可行的途徑。

在這項研究中，來自于NanoTemper的微量熱泳動MST互作技術以及nanoDSF蛋白穩(wěn)定性技術發(fā)揮了重要的作用。

圖注：微量熱泳動(MST)實驗，作者用AR (NTD，1-555aa)–mEGFP

蛋白與不同濃度的ET516（藍色）以及Enza（紅色）孵育進行MST實驗。mEGFP蛋白用作陰性對照（綠色）。使用親和力分析軟件擬合數(shù)據(jù)。結果表明，ET516與NTD的親和力K_d值25µM，表明ET516可以作為很好的候選分子。

圖注：與ET516孵育的AR AF-1（144-450 aa，0.3 mg/mL）中的TSA測定

加熱過程從25℃增加到81.5℃，升溫速率為1℃/min。記錄發(fā)射強度比（Em350nm\/Em330nm），分析熒光強度比（左圖）和一階導數(shù)（右圖）。

監(jiān)測蛋白內(nèi)源熒光的nanoDSF實驗顯示，ET516處理后AR AF-1中的熒光比率呈劑量依賴性下降，進一步證實了ET516和AF-1的相互作用。熱位移TSA結果表明，AF-1是典型的固有無序蛋白，其在加熱過程中沒有明顯的發(fā)射強度變化；然而，與ET516孵育誘導了AF-1熔化溫度的劑量依賴性變化，表現(xiàn)為球狀蛋白，表明ET516與重新分布后穩(wěn)定的構象AF-1結合。Promethus系列儀器通過內(nèi)源熒光檢測，無需加入染料，對緩沖液沒有要求，高精準的檢測精度可以保證即使是極小結構變化造成的Tm值shift都可以很好表征。

對于固有無序蛋白，因為其蛋白的無序性的特性，其他常規(guī)方法難以進行檢測。在這篇工作中，通過MST技術及nanoDSF技術，很好的篩選到目的分子。

Monolith系列分子互作儀基于MST技術，不依賴于分子量的改變，蛋白用量少，對于蛋白聚集耐受度高，可以輕松表征不同類型的分子間相互作用。

Promethus系列儀器，以nanoDSF技術為核心，通過檢測蛋白內(nèi)源熒光監(jiān)測蛋白的穩(wěn)定性，該技術檢測蛋白濃度寬泛，低濃度也可輕松表征，媲美DSC的高精準檢測結果，快速高通量的檢測速度，在小分子篩選上具有不可比擬的優(yōu)勢。