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多糖涂敷型手性柱(反相流動(dòng)相)沖洗方法

來(lái)源:廣州綠百草科學(xué)儀器有限公司   2022年11月11日 14:46  

當(dāng)手性色譜柱分離度下降、

柱壓過(guò)高等色譜柱異常現(xiàn)象發(fā)生時(shí),

才需要使用本方法沖洗

以下沖洗步驟及流動(dòng)相體系僅適用于大賽璐多糖涂敷型反相手性柱AD-RH/AD-3R,AS-RH/AS-3R,AY-RH/AY-3R,AZ-RH/AZ-3R,OD-R/OD-RH/OD-3R,OJ-RH/OJ-3R,OX-RH/OX-3R,OZ-RH/OZ-3R,流速僅適用于3/5/10µm, 4.6*150/250mm規(guī)格,對(duì)于其他規(guī)格的手性柱,其沖洗時(shí)所用的流速請(qǐng)根據(jù)各自所能耐受柱壓不同另行調(diào)整。


1、一般情況下,使用常規(guī)方法沖洗色譜柱;若常規(guī)方法無(wú)效,則使用特殊方法一沖洗色譜柱;若特殊方法一無(wú)效,則使用特殊方法二沖洗色譜柱。

2、沖洗過(guò)程中,10µm柱柱壓請(qǐng)勿超過(guò)3Mpa,5µm柱柱壓請(qǐng)勿超過(guò)6Mpa,3µm柱柱壓請(qǐng)勿超過(guò)15Mpa。

3、以下沖洗過(guò)程中涉及的流速僅供參考,實(shí)際操作中以柱壓不超過(guò)以上說(shuō)明為宜。

4、以下沖洗過(guò)程中提到的20倍柱體積,以4.6*150mm規(guī)格柱為例,約為30mL。



沖洗方法

常規(guī)方法:

1、用水/甲醇或水/乙腈(80/20,v/v或85/15,v/v),流速0.5ml/min,沖洗20倍柱體積;

2、沖洗結(jié)束,驗(yàn)柱或重復(fù)以前的樣品實(shí)驗(yàn),看是否柱效有提高。

特殊方法一:

1、 用水/甲醇(90/10,v/v),流速0.5 ml/min,沖洗20倍柱體積;

2、逐漸提高甲醇的比例到100%,然后以甲醇100%,0.3ml/min左右的流速,沖洗20倍柱體積;

3、逐漸增加水的比例至90%,即水/甲醇(90/10,v/v);

4、沖洗結(jié)束,驗(yàn)柱或重復(fù)以前的樣品實(shí)驗(yàn),看是否柱效有提高。

特殊方法二:

1、用水/甲醇(90/10,v/v),流速0.5 ml/min,沖洗20倍柱體積;

2、逐漸提高甲醇的比例到100%,然后以甲醇100%,0.3ml/min左右的流速,沖洗20倍柱體積;

3、再用酸性流動(dòng)相,甲醇/三氟·乙酸(100/0.1,v/v),0.3ml/min的流速,沖洗20倍柱體積;

4、再用中性流動(dòng)相甲醇過(guò)渡,甲醇100%,0.3ml/min的流速,沖洗20倍柱體積;

5、逐漸增加水的比例到90%,即水/甲醇(90/10,v/v);

6、沖洗結(jié)束,驗(yàn)柱或重復(fù)之前的樣品實(shí)驗(yàn),看是否有提高柱效。





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