Fragment-based drug discovery(FBDD)，是先導化合物發(fā)現(xiàn)的主流方法之一。它利用核磁共振技術（NMR）、X-射線單晶衍射（X-ray）以及熱遷移分析（TSA） 等方法篩選出與靶蛋白有弱相互作用的小分子片段，之后基于其結構信息對活性片段進行優(yōu)化，進而得到更高活性的先導化合物進行新藥的研發(fā)。

在篩選小分子片段時，NMR能在接近生理條件的溶液中獲得結合部位信息以及K_d，但其缺點為只能檢測比較小的蛋白，且樣品消耗量大。X-ray則需要先制備蛋白晶體，并且蛋白晶體和其在溶液中的構象可能會有差異。此外，這兩種方法都需要非常昂貴的設備，通常只能在專用的平臺由專業(yè)操作人員協(xié)助開展實驗。

TSA（Thermal shift assay）通過檢測蛋白的熔解溫度Tm變化來進行蛋白結合配體的篩選，其檢測速度快，實驗門檻低。因此我們可以先使用TSA進行初級篩選,之后結合NMR或X-ray進行驗證。TSA的主要技術有染料法以及無標記的nanoDSF技術。在之前的文章中我們已經介紹過這兩種技術的原理及對比, 小編今天將和大家分享荷蘭癌癥研究所（NKI）的研究人員發(fā)表在JoVE實驗視頻期刊基于nanoDSF技術建立的片段化合物庫篩選Protocol。

實驗小貼士

操作演示

除了無標記nanoDSF檢測模塊外，Prometheus蛋白穩(wěn)定性分析儀還可搭載動態(tài)光散射（DLS），靜態(tài)光散射（SLS）和背反射（Backreflection）模塊，只需要10μl樣品就可以完成均一性，熱穩(wěn)定性，膠體穩(wěn)定性的檢測。同時我們還提供自動化解決方案，便于客戶進行無人值守的高通量篩選。