ELISA試劑盒溫育這一步是ELISA測定中zui簡單出現(xiàn)問題的過程，所以有時(shí)候一份標(biāo)本用一樣的試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，通常就是上述加樣及試劑的過錯(cuò)所造成的。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易致使非特異吸附。其次，如今的產(chǎn)品ELISA試劑盒中的洗板液均需在試驗(yàn)室運(yùn)用時(shí)對所供給的濃縮液稀釋制造，因而稀釋時(shí)所用的蒸餾水或去離子水應(yīng)保證質(zhì)量。最為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。這么做的意圖，首要是為了在后面的溫育反響過程中，能使反響微孔內(nèi)的溫度能較快地到達(dá)所請求的高度，以滿足測定請求。再如醫(yī)治藥物的檢查，應(yīng)根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)挑選服藥后的最適時(shí)刻抽血檢查。溫育所需時(shí)刻與溫度成反比，即溫度越高，則所需時(shí)刻相對較短。運(yùn)用微量加樣器加樣必需留心的紐帶點(diǎn)是：加樣不行太快，要防止加在孔壁上部，不行濺起和產(chǎn)氣憤泡。對用于激素和醫(yī)治藥物測定的血清標(biāo)本的搜集，要留心搜集時(shí)刻甚或體位有也許會對測定成果發(fā)生影響。

溫育是ELISA測定中影響測定勝敗最為紐帶的一個(gè)因素。ELISA試劑盒如今上運(yùn)用血清標(biāo)本測定的標(biāo)志物通常有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和醫(yī)治藥物等。試劑的參加在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加，除了要留心滴加的角度外，滴加的速度也很主要，滴加太快，很容易泛起重復(fù)滴加或加在兩孔之間的景象，這么就會在孔內(nèi)的非包被區(qū)泛起非特異吸附，從而引起非特異顯色。如可de松在早晨4～6點(diǎn)之間，會有一峰值泛起：生長激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發(fā)性方法開釋，因而，在測定此類激素時(shí)，有必要在嚴(yán)密密切相連的時(shí)刻間隔內(nèi)采取數(shù)份血樣本，以其間心值為測定值。因而在ELISA測定中試劑的準(zhǔn)備最為紐帶的是，在試驗(yàn)開端前，將試劑盒先從冰箱中拿出來，在室溫下放置20分鐘以上后，再進(jìn)行測定，以使試劑盒在運(yùn)用前與室溫平衡。加血清樣本及反響試劑在如今的ELISA試劑盒中，血清樣本的參加幾乎是du一的要運(yùn)用微量加樣器參加樣本的過程。

ELISA試劑盒測定現(xiàn)通常為采用手藝操縱的以微孔板條為固相的測定形式，測定操縱非常儉樸，通常涉及到標(biāo)本的搜集保存、試劑準(zhǔn)備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、成果斷定和成果演說及解說等方面，其間任一過程的不妥都會影響測定成果，且尤以加樣、溫育和洗板等過程為甚。濺起會對接近孔發(fā)生污染。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物和特種蛋白等的檢查的血清標(biāo)本的搜集則沒有時(shí)刻和體位方面的影響。ELISA作為一種固相免疫測定，抗原抗體的聯(lián)系反響在固相長進(jìn)行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原che底聯(lián)系，必需在必定的溫度前提下反響必定的時(shí)刻。