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高效液相色譜儀(HPLC)是應(yīng)用高效液相色譜原理，主要用于分析高沸點不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量大的有機(jī)化合物的儀器設(shè)備。它由儲液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相) 內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運(yùn)動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。HPLC廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、食品科學(xué)、藥物研究以及環(huán)境研究中。
高效液相色譜儀的校正是通過分析制備的標(biāo)準(zhǔn)樣品來確定計算絕對組分濃度的響應(yīng)系數(shù)的過程。
1.外標(biāo)法：外標(biāo)法是在空白樣品中加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為對照樣品，與未知樣品同時進(jìn)行樣品處理和檢測，并計算出被檢測成分的濃度的定量方法。根據(jù)對照品響應(yīng)值與標(biāo)準(zhǔn)品濃度函數(shù)的關(guān)系，測定未知試樣中的成分。
2.內(nèi)標(biāo)法：內(nèi)標(biāo)法是將一定重量的純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物加入一定量的被測樣品混合物中，對含有內(nèi)標(biāo)物的樣品進(jìn)行高效液相色譜儀分析，測定峰面積和相對含量。分別測定內(nèi)標(biāo)物和受試物的有效校正系數(shù)，并按公式計算受試物的含量。
兩種適合的數(shù)據(jù)處理方法的差別為高效液相色譜儀：內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)方法是將標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為要求的內(nèi)部條件，并以合適的操作條件對樣品進(jìn)行嚴(yán)格的試驗和試驗結(jié)果的檢驗，但對樣品的準(zhǔn)確操作條件和試驗結(jié)果的分析必須是嚴(yán)格的，而對樣品的內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)則不需要對樣品進(jìn)行嚴(yán)格的校正。
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