手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號(hào)：chem17
掃碼關(guān)注視頻號(hào)
硅膠因其優(yōu)良的機(jī)械強(qiáng)度和表面易改性等特征，已成為應(yīng)用廣泛的色譜柱填料。硅膠柱具有柱效高、選擇性好及分析速度快等特點(diǎn)，因而被廣泛用于分離極性小分子如藥物，而用于糖、肽或蛋白質(zhì)分離較少。
硅膠色譜柱主要是通過(guò)硅膠的硅羥基吸附能力進(jìn)行物質(zhì)的分離，填充顆粒主要是硅膠，所用溶劑常見(jiàn)的是乙酸乙酯，石油醚，不能使用水，對(duì)于極性差別比較大的物質(zhì)分離效果好。
硅膠色譜柱使用方法：
1、稱量
200-300目硅膠，稱30-70倍于上樣量；如果極難分，也可以用100倍量的硅膠H。干硅膠的視密度在0.4左右，所以要稱40g硅膠，用燒杯量100ml也可以。
2.攪成勻漿
加入干硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分?jǐn)嚢琛Ｈ绻疵搫┦鞘兔?乙酸乙酯/丙酮體系，就用石油醚拌。
3.裝柱
將柱底用棉花塞緊，不*海沙，加入約1/3體積石油醚，裝上蓄液球，打開(kāi)柱下活塞，將勻漿一次傾入蓄液球內(nèi)。隨著沉降，會(huì)有一些硅膠沾在蓄液球內(nèi)，用石油醚將其沖入柱中。
4.壓實(shí)
沉降完成后，加入更多的石油醚，用雙聯(lián)球或氣泵加壓，直至流速恒定。柱床約被壓縮至9/10體積。無(wú)論走常壓柱或加壓柱，都應(yīng)進(jìn)行這一步，可使分離度提高很多，且可以避免過(guò)柱時(shí)由于柱床產(chǎn)生開(kāi)裂。
5.上樣
干法濕法都可以。海沙是沒(méi)必要的。上樣后，加入一些洗脫劑，再將一團(tuán)脫脂棉塞至接近硅膠表面。然后就可以放心地加入大量洗脫劑，而不會(huì)沖壞硅膠表面。
6.過(guò)柱和收集
柱層析實(shí)際上是在擴(kuò)散和分離之間的權(quán)衡。太低的洗脫強(qiáng)度并不好，推薦用梯度洗脫。收集的例子：10mg上樣量，1g硅膠H，0.5ml收一餾分；1-2g上樣量，50g硅膠（200-300目），20-50ml收一餾分。
7.檢測(cè)
要更多地使用專用噴顯劑，如果僅用紫外燈，會(huì)損失較多產(chǎn)品，紫外的靈敏度一般比噴顯劑低1-2個(gè)數(shù)量級(jí)。
8.送譜
收集的產(chǎn)品旋干，在送譜前通常需要重結(jié)晶。如果樣品太少或?yàn)橐后w，可過(guò)一小凝膠柱，作為送譜前的最后純化手段?？沙渥V1.5ppm左右所謂的“硅膠”峰。
高純硅膠色譜柱的儲(chǔ)存方法：
1、避免用純凈水沖洗鍵合致密的C18柱。
2、防止緩沖溶液和水溶液流動(dòng)相產(chǎn)生微生物，做到流動(dòng)相用多少配多少，或在水流動(dòng)相中加200ppm的疊氮鈉以抑制細(xì)菌成長(zhǎng)或在流動(dòng)相中加20%的有機(jī)改性劑，也可抑制微生物生長(zhǎng)，有機(jī)改性劑還有助于流動(dòng)相脫氣。
3、使用緩沖溶液后的產(chǎn)品，應(yīng)用15～20倍柱體積的不含緩沖劑的同種水—有機(jī)溶劑流動(dòng)相沖洗色譜柱，后換成有機(jī)溶劑儲(chǔ)存。
4、將兩端用堵頭擰好，以免柱床填料干裂。
5、盡可能將色譜柱貯存于*有機(jī)溶劑中，避免在緩沖溶液中保存。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購(gòu)中心