全自動(dòng)脂肪測(cè)定儀不是測(cè)量人體脂肪含量的儀器,而是主要用來測(cè)定糧食(包括玉米、稻谷)品質(zhì)判定指標(biāo)----脂肪酸值的專用設(shè)備,同時(shí)適用于其他糧食及糧食制品脂肪酸值測(cè)定。
肉及其制品中除游離脂肪外,肌肉組織中還存在一些結(jié)合脂類,因此脂肪測(cè)定分兩類,即總脂肪(包括結(jié)合脂在內(nèi))和游離脂肪。
1、氯仿-甲醇提取法
1)原理:將試樣分散于氯仿-甲醇混合液中,于水浴上輕微沸騰,氯仿-甲醇混合液與一定的水分形成提取脂類的有效溶劑,在使試樣組織中結(jié)合態(tài)脂類游離出來的同時(shí)增大了與磷脂等極性脂類的親和性,從而有效地提取出全部脂類。再經(jīng)過濾除去非脂成分,然后回收溶劑,對(duì)于殘留脂類要用石油醚提取,定量。
2)儀器
?、倬呷瞧?/div>
②電熱恒溫水浴鍋:50~100℃
?、厶崛⊙b置
④布氏漏斗:11G-3、過濾板直徑40mm,容量60~100ml
?、菥呷x心管
?、揠x心機(jī):3000轉(zhuǎn)/min
?、呓M織搗碎機(jī)
3)試劑
①氯仿:體積分?jǐn)?shù)為97%以上
?、诩状迹后w積分?jǐn)?shù)為96%以上
?、勐确?甲醇混合液:按2:1體積比混合
④石油醚
?、轃o水Na2SO4:以120~135℃干燥1~2h
4)操作方法
?、偬崛。簻?zhǔn)確稱取均勻樣品5g置于具塞三角瓶?jī)?nèi)(高水分食品可加適量硅藻土使其分散),加入60ml氯仿-乙醇混合液(對(duì)于干燥食品,可加入2~3ml水)。連接提取裝置,將其置于65℃水浴中,由輕微沸騰開始,加熱1h進(jìn)行提取。
②回收溶劑:提取結(jié)束后,取下燒瓶用布氏漏斗過濾,并且用氯仿-甲醇混合液洗滌濾器、燒瓶及濾器中試樣殘?jiān)?,濾液、洗滌液一并收集于具塞三角瓶?jī)?nèi),置65~70℃水浴中回收溶劑,至燒瓶?jī)?nèi)物料呈濃稠狀,而不能使其干涸,然后冷卻。
?、凼兔演腿?、定量:用移液管加入25ml石油醚,然后加入15g無水無水Na2SO4,立即加塞混搖1min,將醚層移入具塞離心沉淀管進(jìn)行離心分離(3000r/min)5min。用10ml移液管迅速吸取離心管中澄清的石油醚10ml,置于已稱量至恒重的干燥稱量瓶?jī)?nèi),蒸發(fā)去除石油醚,于100~105℃烘箱中烘至恒量(約30min)。
5)結(jié)果計(jì)算
6)注意事項(xiàng)
?、偬崛〗Y(jié)束后先用玻璃過濾器過濾,再用溶劑洗滌燒瓶,每次用5ml洗3次,然后用30ml洗滌殘?jiān)盀V器,洗滌殘?jiān)鼤r(shí)可用玻璃棒一邊攪拌試樣殘?jiān)?,一邊用溶劑洗滌?/div>
?、诨厥杖軇┮部衫盟魇铣樘崞?,抽脂瓶需事先恒重后,再把提取液移入提脂瓶。
?、廴軇┗厥諝埩粑飸?yīng)具有一定流動(dòng)性,不能全部干涸,否則脂類難以溶解于石油醚而使測(cè)定值偏低。故最好在殘留有適量水分時(shí)停止蒸發(fā)。
4)在用石油醚萃取時(shí),應(yīng)先加石油醚再加無水無水Na2SO4,以免影響脂肪的溶解。
2、酸水解法
1)原理:試樣與稀HCl共同煮沸,試樣中蛋白質(zhì)及碳水化合物被水解,細(xì)胞壁被破壞,游離出包含的和結(jié)合的脂類部分,過濾得到的物質(zhì),干燥,然后用正己烷或石油醚抽提留在濾器上的脂肪,除去溶劑,即得脂肪總量。
2)試劑
?、俪樘釀赫和榛?0~60℃沸程的石油醚
②2mol/l的HCl溶液
?、鬯{(lán)色石蕊試紙
④玻璃珠
3)儀器及用具
?、賹?shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器和設(shè)備
?、诮g肉機(jī):孔徑不超過4mm
?、鬯魇铣樘崞?/div>
4)的制備:取有代表性的試樣至少200g,于絞肉機(jī)中使其均質(zhì)化(至少絞兩次)并混勻,封閉儲(chǔ)存于一盛滿的容器中(防止其腐爛和成分變化),并盡可能提早分析試樣。
5)操作方法
?、偎崴猓悍Q取試樣3~5g,精確至0.001g,置于250ml錐形瓶中,加入2mol/LHCl溶液50ml,蓋上小表面皿,于石棉網(wǎng)上用火加熱至沸騰,繼續(xù)用小火煮沸1h并不時(shí)振搖,取下,加入熱水150ml,混勻,過濾。錐形瓶和小表面皿用熱水洗凈,一并過濾。沉淀用熱水洗至中性(用藍(lán)色石蕊試紙檢驗(yàn))。將沉淀與濾紙置于大表面皿上,連同錐形瓶和小表面皿一起于(103±2)℃干燥箱內(nèi)干燥1h,冷卻。
?、诔樘嶂荆簩⒑娓傻臑V紙放入襯有脫脂棉的濾紙筒中,用經(jīng)抽提劑潤(rùn)濕的脫脂棉擦凈錐形瓶、小表面皿和大表面皿上遺留的脂肪,放入濾紙筒中。將濾紙筒放入索氏抽提器的抽提筒內(nèi),連接內(nèi)裝少量玻璃珠并已干燥至恒重的接受瓶,加入抽提劑至瓶?jī)?nèi)容積的2/3處,于水浴上加熱,使抽提劑每5~6min回流一次,抽提4h。
?、鄯Q量:取下接受瓶,回收抽提劑,待瓶中抽提劑剩1~2ml時(shí),在水浴上蒸干,于(103±2)℃干燥箱內(nèi)干燥30min,置于干燥器內(nèi)冷卻至室溫,稱量。重復(fù)以上烘干、冷卻和稱量過程,直至相繼兩次稱量結(jié)果之差不超過試樣質(zhì)量的0.1%。
④抽提程度的驗(yàn)證:用第二個(gè)內(nèi)裝玻璃珠、已干燥至恒重的接受瓶,用新的抽提劑繼續(xù)抽提1h,增量不得超過試樣質(zhì)量的0.1%。同一試樣進(jìn)行兩次測(cè)定。
6)結(jié)果計(jì)算
7)允許誤差:由同一分析者同時(shí)或相繼進(jìn)行的兩次測(cè)定結(jié)果之差不得超過0.5%。
8)注意事項(xiàng)
?、俜湃霝V紙筒時(shí)高度不要超過回流彎管,否則超過回流彎管以上部分樣品中的脂肪不能提盡造成誤差。
?、谔崛r(shí)水浴溫度不可過高,回流速度控制在5~6min回流一次為宜。
?、墼诔樘釙r(shí)冷卻管上端最好連接一個(gè)CaCl2管,這不僅可以防止空氣中水分的進(jìn)入,還可避免抽提劑的揮發(fā)。若無此裝置,可松松地塞一團(tuán)干燥的脫脂棉球。
④浸出物在烘箱內(nèi)干燥時(shí)間不能過長(zhǎng),因?yàn)闃O不飽和脂肪酸會(huì)受熱氧化而增加質(zhì)量。
⑤抽提瓶干燥時(shí),瓶口應(yīng)側(cè)倒放置,使揮發(fā)物易與空氣形成對(duì)流,干燥較快。
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