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用什么熒光燈可以看GFP綠色熒光蛋白

來源:上海路陽儀器有限公司   2023年02月02日 13:37  

用什么熒光燈可以看GFP綠色熒光蛋白?

LUYOR-3415RG便攜式雙波長熒光燈可與熒光蛋白觀察眼鏡luv-30A或 luv-50A一起使用直接觀察綠色熒光蛋白(GFP)或紅色熒光蛋白(RFP)。激發(fā)光源與觀察眼鏡LUV-30A共同使用,可在動(dòng)物設(shè)備的固定位置如層流柜直接觀察綠色熒光蛋白(GFP)。LUYOR-3415RG激發(fā)光源使用鋰電池組供電,可與觀察鏡luv-30A 或 luv-50A一起使用直接觀察綠色熒光蛋白(GFP)或黃色熒光蛋白(YFP)。

綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)

 綠色熒光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)是一類存在于腔腸動(dòng)物體內(nèi)的生物發(fā)光蛋白。GFP具有多種優(yōu)點(diǎn):易于檢測,靈敏度高;熒光性質(zhì)穩(wěn)定,耐受性強(qiáng);易于表達(dá),無細(xì)胞毒性;可用于活細(xì)胞檢測。因此,GFP可作為報(bào)告基因用于檢測基因表達(dá)或調(diào)控,或作為融合標(biāo)簽來檢測蛋白質(zhì)分子的定位、遷移、構(gòu)象變化以及分子間的相互作用,或者靶向標(biāo)記某些細(xì)胞器。


GFP吸收的光譜峰值為395nm(紫外),并有一個(gè)峰值為470nm的副吸收峰(藍(lán)光);發(fā)射光譜峰值為509nm(綠光),并帶有峰值為540nm的側(cè)峰(Shouder)。雖然450~490nm只是GFP的副吸收峰,但由于該激發(fā)光對(duì)細(xì)胞的傷害更小,因此通常多使用該波段光源(多為488nm)。此外,GFP的光譜特性與熒光素異硫氰酸鹽(FITC)很相似,兩者通常共有一套濾光片。GFP熒光極其穩(wěn)定,在激發(fā)光照射下,GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比熒光素強(qiáng),特別是在450~490nm藍(lán)光波長下更穩(wěn)定。


類似的,GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠(yuǎn)比熒光素標(biāo)記的熒光抗體高,抗光漂白能力強(qiáng),因此更適用于定量測定與分析。由于GFP熒光的產(chǎn)生不需要任何外源反應(yīng)底物,因此GFP作為一種廣泛應(yīng)用的活體報(bào)告蛋白,其作用是任何其它酶類報(bào)告蛋白WFBL的。但因?yàn)镚FP不是酶,熒光信號(hào)沒有酶學(xué)放大效果,因此GFP靈敏度可能低于某些酶類報(bào)告蛋白,比如螢火蟲熒光素酶等。

觀察GFP熒光蛋白方法有:

1.便攜式GFP激發(fā)光源:

采用便攜式GFP激發(fā)光源(又叫熒光蛋白觀測鏡)是zui便捷、zui方便的觀察方法,因GFP在470nm有一個(gè)很高的吸收峰,采用  470nm激發(fā)光源能夠激發(fā)GFP發(fā)出明亮的綠色熒光,在觀察gfp熒光時(shí),因?yàn)榧ぐl(fā)光為強(qiáng)烈的藍(lán)色光線,必須佩戴專業(yè)的觀察眼鏡才能觀察到清晰的熒光信號(hào)。推薦使用美國路陽LUYOR-3415或LUYOR-3410便攜式激發(fā)光源。

上圖為采用便攜式GFP激發(fā)光源觀察到的效果

2. 紫外光源(紫外熒光燈):

采用紫外光源(又叫紫外線燈、黑光燈)觀察也非常方便,但如果觀察植物,植物葉片的葉綠色在紫外線燈下也會(huì)發(fā)出熒光,對(duì)gfp發(fā)出的熒光也會(huì)產(chǎn)生干擾,另外,標(biāo)本長時(shí)間在紫外光源照射下對(duì)GFP標(biāo)本組織也會(huì)造成破壞。

LUYOR-3415RG熒光蛋白激發(fā)光源可野外、實(shí)驗(yàn)室原位測定GFP(綠色熒光蛋白)。通過定點(diǎn)觀察GFP,可有利于學(xué)習(xí)如何操縱和提高有用的染色體特性,從而可以篩選出高基因表達(dá)的植物。

LUYOR-3415RG熒光蛋白激發(fā)光源的應(yīng)用:

1、 野外、實(shí)驗(yàn)室原位測定GFP(綠色熒光蛋白)。

2、 應(yīng)用于轉(zhuǎn)基因作物研究。

3、 區(qū)別可遺傳性改良生物體和不可遺傳的改良生物體。

4、 用于基因表達(dá)的研究。

5、 用于Rhodamine(紅色熒光染料)、葉綠素、熒光素的研究。


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