抗體,又名免疫球蛋白 (Ig),是一種由 B 細胞產(chǎn)生的大型 Y 形糖蛋白,可在免疫防御中起主要作用??贵w與病原體的特定分子(即抗原)發(fā)生特異性結(jié)合。
抗體以一個或者多個 Y 形單體存在,每個 Y 形單體由 4 條多肽鏈組成。每個 Y 形單體包含兩條相同的重鏈(H)和兩條相同的輕鏈(L),重鏈和輕鏈的序列和長度不同。Y 形單體的頂部包含可變區(qū)(V),也稱抗原結(jié)合片段(F(ab))區(qū)。該區(qū)可與給定抗原上的表位特異性緊密結(jié)合。
抗體的基本結(jié)構(gòu)包含恒定區(qū)(C)和可結(jié)晶片段(Fc)區(qū)。這一區(qū)域?qū)贵w的免疫應(yīng)答功能非常重要。此外,將熒光染料和酶經(jīng)共價鍵連接到抗體的 Fc 部位,可實現(xiàn)實驗的可視化。
Y形抗體通過彈性的鉸鏈區(qū)連接到中部??乖Y(jié)合發(fā)生在由免疫球蛋白重鏈(H)和輕鏈(L)組成的可變區(qū)(V)??贵w的基本結(jié)構(gòu)由恒定區(qū)(C)組成。根據(jù)多肽序列的微小差異,抗體的輕鏈都可分為 kappa (κ) 型或 lambda (λ) 型。重鏈結(jié)構(gòu)決定了各個抗體的總類。
哺乳動物體內(nèi)的抗體分為 5 種同種型:IgG、IgM、IgA、IgD 和 IgE。各個同種型都有相應(yīng)的結(jié)構(gòu)。這些同種型因 Y 形結(jié)構(gòu)的數(shù)量和重鏈種類而異。它們的生物學特性、功能區(qū)域以及結(jié)合不同抗原的能力有所不同。
由多種抗原決定簇刺激機體,相應(yīng)地就產(chǎn)生各種各樣的單克隆抗體,這些單克隆抗體混雜在一起就稱為多克隆抗體,機體內(nèi)所產(chǎn)生的抗體就是多克隆抗體。除了抗原決定簇的多樣性以外,同樣一種抗原決定簇,也可刺激機體產(chǎn)生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五類抗體。與單克隆抗體相比,大量多克隆抗體的生產(chǎn)相對快速且成本低廉。它們是非特異性的,因為它們能夠識別任何一種抗原上的多個表位。
(二)優(yōu)勢和局限性
1.多克隆抗體的優(yōu)勢
(1)可以幫助增加 WB 信號,因為抗體將與多個表位結(jié)合。
(2)由于識別多個表位,多克隆抗體可以在 IP/ChIP 檢測中提供更好的結(jié)果。
(3)更能容忍抗原的微小變化,例如多態(tài)性、糖基化異質(zhì)性或輕微變性。
(4)當抗原的性質(zhì)未知時很有用
(5)生產(chǎn)成本低,時間短
2.多克隆抗體的缺點
(1)更容易出現(xiàn)批次間的差異。
(2)多個表位使得檢查免疫原序列是否存在任何潛在的交叉反應(yīng)變得很重要。
(三)應(yīng)用
一種良好的多克隆抗血清含有抗某種抗原不同表位的多種抗體。由于多克隆抗血清通常包含抗某一抗原的不同表位的抗體,包括變性—抗性的表位,所以,在深固定的樣本中也會發(fā)揮效應(yīng),在石蠟包埋組織切片的染色中,多克隆抗體常選用。根據(jù)實驗的不同需要,多克隆抗體應(yīng)用于相應(yīng)抗原的標記。此外,在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中,多克隆抗體被用于農(nóng)藥殘留現(xiàn)場監(jiān)測;在臨床應(yīng)用中,多克隆抗體主要用于病原物的檢測、疾病的診斷及治療,如作為蛋白類免疫抑制劑用于移植反應(yīng)和自身免疫病的治療。
三、單克隆抗體與多克隆抗體制備流程的比較
經(jīng)過特定抗原處理過的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞通過細胞融合的方法得到雜交瘤細胞,經(jīng)HAT培養(yǎng)基篩選、ELISA檢測效價后就得到陽性克隆株,最后進行細胞培養(yǎng)或?qū)⒓毎⑷氲絼游铮ㄒ话銥閎alb/c小鼠)腹腔中用腹水培養(yǎng),收集上清/腹水純化后就能得到單克隆抗體。而制備多克隆抗體就沒有單克隆抗體繁瑣,只需將抗原(純度越高越好)直接注入到動物體內(nèi)進行免疫,經(jīng)過3至4次免疫,ELISA測其效價合格后,收集血液離心得到上清,純化后即能得到多克隆抗體。
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