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有了它,掌握固相萃取小柱原理會更輕松

來源:賽默飛色譜及質(zhì)譜   2023年02月15日 17:32  
  固相萃取小柱是從層析柱發(fā)展而來的一種用于萃取、分離、濃縮的樣品前處理裝置。主要應(yīng)用于各種食品、農(nóng)畜產(chǎn)品、環(huán)境樣品以及生物樣品中目標化合物的樣品前處理。固相萃取技術(shù)已經(jīng)被廣泛地使用在許多國標(GB/T)以及行業(yè)分析標準中。
 
  它的容量是指固相萃取柱填料的吸附量。對于以硅膠為基質(zhì)的固相萃取柱,其容量一般在1~5 mg/100 mg,也就是柱容量是填料質(zhì)量的1%~5%。而鍵合硅膠離子交換吸附劑填料的容量以meq/g表示,即每克填料的容量為X毫克當量。這類填料的容量通常在0.5~1.5 meq/g。
 

 

  固相萃取小柱原理如下:
  1、選擇SPE固相萃取小柱或濾膜:首先應(yīng)根據(jù)待測物的理化性質(zhì)和樣品基質(zhì),選擇對待測物有較強保留能力的固定相。若待測物帶負電荷,可用陰離子交換填料,反之則用陽離子交換填料。若為中性待測物,可用反相填料萃取。SPE小柱或濾膜的大小與規(guī)格應(yīng)視樣品中待測物的濃度大小而定。對于濃度較低的體內(nèi)樣品,一般應(yīng)選用盡量少的固定相填料萃取較大體積的樣品。
 
  2、活化:萃取前先用充滿小柱的溶劑沖洗小柱或用5~10ml溶劑沖洗濾膜。一般可先用甲醇等水溶性有機溶劑沖洗填料,因為甲醇能潤濕吸附劑表面,并滲透到非極性的硅膠鍵合相中,使硅膠更容易被水潤濕,之后再加入水或緩沖液沖洗。加樣前,應(yīng)使SPE填料保持濕潤,如果填料干燥會降低樣品保固相萃取技術(shù)方法固相萃取技術(shù)方法留值;而各小柱的干燥程度不一,則會影響回收率的重現(xiàn)性。
 
  3、上樣:一般可采取以下措施:
 ?、儆?.1mol/L酸或堿調(diào)節(jié),使pH<3或pH>9,離心取上層液萃取;
 ?、谟眉状?、乙腈等沉淀蛋白質(zhì)后取上清液,以水或緩沖液稀釋后萃??;
 ?、塾盟峄驘o機鹽沉淀蛋白質(zhì)后取上清液,調(diào)節(jié)pH值后萃??;
 ?、艹?5min后加入水、緩沖液,取上清液萃取。尿液樣品中的藥物濃度較高,加樣前先用水或緩沖液稀釋,必要時可用酸、堿水解反應(yīng)破壞藥物與蛋白質(zhì)的結(jié)合,然后萃取。流速應(yīng)控制為1ml/min,流速快不利于待測物與固定相結(jié)合。
 
  4、淋洗,反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液,可在清洗液中加入少量有機溶劑、無機鹽或調(diào)節(jié)pH值。加入小柱的清洗液應(yīng)不超過一個小柱的容積,而SPE濾膜為5~10ml。
 
  5、洗脫待測物,應(yīng)選用5~10ml離子強度較弱但能洗下待測物的洗脫溶劑。若需較高靈敏度,則可先將洗脫液揮干后,再用流動相重組殘留物后進樣。體內(nèi)樣品洗脫后多含有水,可選用冷凍干燥法。保留能力較弱的SPE填料可用小體積、較弱的洗脫液洗下待測物,再用極性較強的HPLC分析柱如C18柱分析洗脫物。若待測物可電離,可調(diào)節(jié)pH值,抑制樣品離子化,以增強待測物在反相SPE填料中的保留,洗脫時調(diào)節(jié)pH值使其離子化并用較弱的溶劑洗脫,收集洗脫液后再調(diào)節(jié)pH值使其在HPLC分析中達到*分離效果。在洗脫過程中應(yīng)減慢流速,用兩次小體積洗脫代替一次大體積洗脫,回收率更高。

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