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elisa實驗過程中可能出現(xiàn)的問題及處理!(轉(zhuǎn))

來源:上海易佰聚經(jīng)貿(mào)有限公司   2009年05月11日 16:31  

elisa實驗過程中可能出現(xiàn)的問題及處理!
一般來講,實驗失敗應(yīng)當(dāng)是技術(shù)錯誤,設(shè)備損壞或反應(yīng)物失效。當(dāng)一個實驗失敗,檢查每個反應(yīng)物的有效期并且確定所有的反應(yīng)物均是按產(chǎn)品標(biāo)示的說明來存放的。另外,查看注意事項部分內(nèi)容。當(dāng)進(jìn)行試驗時如果出現(xiàn)可疑的現(xiàn)象或發(fā)生問題,可以參照下表來分析問題。


可能問題
可能原因
采用措施
無顏色
漏加酶標(biāo)抗體
檢查操作流程,注意不要漏加
酶標(biāo)抗體污染了疊氮鈉
應(yīng)嚴(yán)格避免疊氮鈉的污染
不同試劑盒組份混用
檢查試劑標(biāo)簽,確認(rèn)所有組份屬于試劑盒中
顯色弱
產(chǎn)品已經(jīng)超過有效期
檢查產(chǎn)品有效期
加入的試劑的體積和時間有誤
確認(rèn)所使用的每一個試劑的體積正確和加入的時間是符合說明書要求的
試劑、樣品用前未能平衡
試劑、樣品用前置室溫平衡30分鐘
孵育時間不足
檢查孵育時間
在溫度變化的環(huán)境內(nèi)孵育酶標(biāo)板
確定孵育的溫度,避免溫度變化
儀器設(shè)定不正確,濾光片不匹配
儀器是否設(shè)定正確,濾光片的使用是否正確
使用了被污染的試劑
檢查試劑是否被污染
拍板不*
經(jīng)拍板后板子要干
整板黃
緩沖液污染
制備新鮮的緩沖液
吸頭重復(fù)使用
吸頭應(yīng)一次性使用
器材被污染
應(yīng)使用無污染的器材
底物液被污染
更換底物液
高復(fù)孔比
洗板不*
洗板部分一定要做得*
出現(xiàn)干板,沒有使用密封袋,密封袋重復(fù)使用
酶標(biāo)板應(yīng)保持濕潤,使用密封袋孵育,注意每步更換新的密封袋
拍干不充分
經(jīng)拍板后板子要干
孔內(nèi)加液體積不均等
確定移液器已校正并且工作正常,吸頭不得重復(fù)使用
緩沖液污染
制備新鮮的緩沖液
高本底
緩沖液污染
制備新鮮的緩沖液
每孔加液體積不均等
確定移液器已校正并且工作正常
洗板不*
洗板部分一定要做得*
拍干不充分
經(jīng)拍板后板子要干
試驗中孵育時間溫度和時間不適當(dāng)
確認(rèn)每一實驗步驟的孵育溫度和時間是否適當(dāng)
酶標(biāo)抗體稀釋錯誤
確認(rèn)工作濃度酶標(biāo)抗體配置正確
底物液受光照時間較長或污染
底物液應(yīng)在使用前打開,并避免強(qiáng)光照射
吸頭重復(fù)使用
吸頭應(yīng)一次性使用
標(biāo)準(zhǔn)曲線線性差
標(biāo)準(zhǔn)加樣錯誤
確定移液器已校正并且工作正常
酶標(biāo)抗體濃度過低
確認(rèn)工作濃度酶標(biāo)抗體配置正確
酶標(biāo)板顯色孵育時間、溫度不足
按說明書要求操作
操作不慎
回顧操作流程,嚴(yán)格按說明書要求操作

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