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反相色譜柱的介紹：
根據(jù)流動(dòng)相和固定相相對(duì)極性不同，液相色譜分為正相色譜和反相色譜。流動(dòng)相極性大于固定相極性的情況，稱為反相色譜。非極性鍵合相色譜可作反相色譜。在現(xiàn)代液相色譜中應(yīng)用廣泛，現(xiàn)代液相色譜分析工作的70%以上是在非極性鍵合固定相上進(jìn)行的。
反相色譜柱的原理：
反相色譜是指利用非極性的反相介質(zhì)為固定相，極性有機(jī)溶劑的水溶液為流動(dòng)相，根據(jù)溶質(zhì)極性(疏水性)的差別進(jìn)行溶質(zhì)分離與純化的洗脫色譜法。溶質(zhì)在反相介質(zhì)上的分配系數(shù)取決于溶質(zhì)的疏水性，一般疏水性越大，分配系數(shù)越大。當(dāng)固定相一定時(shí)，可以通過調(diào)節(jié)流動(dòng)相的組成調(diào)整溶質(zhì)的分配系數(shù)。由于反相介質(zhì)表面為強(qiáng)烈疏水性，并且流動(dòng)相為低極性的有機(jī)溶劑，生物活性大分子在反相色譜分離過程中容易變性失活，以回收生物活性蛋白質(zhì)為目的時(shí)，應(yīng)注意選用適宜的反相介質(zhì)。
反相色譜固定相大多是硅膠表面鍵合疏水基團(tuán)，基于樣品中的不同組分和疏水基團(tuán)之間疏水作用的不同而分離。在生物大分子分離中，多采用離子強(qiáng)度較低的酸性水溶液，添加一定量乙腈、異丙醇或甲醇等與水互溶的有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相。
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