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ibidi與你共探顯微鏡奧秘,知識(shí)與技巧帶你沖破液面難題!

來(lái)源:拓赫機(jī)電科技(上海)有限公司   2023年05月26日 17:18  

  想改善您的顯微鏡圖像嗎?您對(duì)自己的圖像總是這樣感到不滿嗎?別擔(dān)心,在這里ibidi雷萌將幫助您獲得精美的圖像!在這里,雷萌將向您展示彎液面的形成是如何干擾相位對(duì)比顯微鏡成像的。如何能獲得清晰且對(duì)比度良好的圖像?

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相差成像 

  到目前為止,相襯是生物光學(xué)顯微鏡中較常用的方法。它是細(xì)胞培養(yǎng)和活細(xì)胞成像中成熟的顯微技術(shù)。當(dāng)使用這種廉價(jià)的技術(shù)時(shí),無(wú)需預(yù)先固定或標(biāo)記,就可以在自然狀態(tài)下觀察活細(xì)胞。  

  未染色的活細(xì)胞幾乎不吸收光。光吸收不良導(dǎo)致圖像中強(qiáng)度分布的差異極小。這使得細(xì)胞在明場(chǎng)顯微鏡下幾乎不可見(jiàn)或根本不可見(jiàn)。當(dāng)光穿過(guò)細(xì)胞時(shí),會(huì)發(fā)生小的相移,這是人眼看不到的。在相差顯微鏡中,這些相移被轉(zhuǎn)換成振幅的變化,可以觀察到圖像對(duì)比度的差異。然而,這種無(wú)標(biāo)記技術(shù)在很大程度上取決于光路中組件的正確對(duì)齊。這種對(duì)準(zhǔn)可能會(huì)受到自然發(fā)生的彎液面效應(yīng)的干擾,從而導(dǎo)致相襯變?nèi)??! ?/span>

  相差顯微鏡要考慮的一個(gè)重要問(wèn)題是彎液面,它是在氣液界面自然形成的。這種現(xiàn)象會(huì)顯著降低圖像質(zhì)量,尤其是在像標(biāo)準(zhǔn)96孔板這樣的小型培養(yǎng)孔中。由于彎液面而產(chǎn)生的衍射擾亂了光路內(nèi)相位環(huán)和相位板的正確對(duì)準(zhǔn)?!   ?/span>

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  左邊具有彎液面的光束路徑未對(duì)準(zhǔn),右邊是無(wú)彎液面的光路對(duì)準(zhǔn)正確,相位對(duì)比良好?! ?/span>

  如何避免彎液面?   

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  ibidi開(kāi)發(fā)出了多種解決方案完-美-地解決了這個(gè)問(wèn)題——并保證出色的相位對(duì)比圖像:  

  * ibidi μ-Slide 15孔3D載玻片和μ-Plate 96孔3D載玻片  

  * ibidi channel μ-Slides通道載玻片  

  * ibidi μ-Slides PH+ 

  * ibidi μ-Dish 35 mm Quad四區(qū)塊 高壁培養(yǎng)皿  

  μ-Slide 15孔3D載玻片 (formerly μ-Slide Angiogenesis)和μ-Plate 96孔3D載玻片 (formerly μ-Plate Angiogenesis 96 Well)    

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  ibidi μ -Slide 15 Well 3D 和μ-Plate 96 Well 3D (下圖右)提供理想的細(xì)胞培養(yǎng)容器: 

  1)可獲得出色的相差圖像;  

  2)一種-獨(dú)-特-的幾何技巧,即“孔中孔”技術(shù),抑制了彎液面的形成,并在整個(gè)觀察區(qū)域產(chǎn)生了良好的相位對(duì)比?! ?/span>

  而普通的細(xì)胞培養(yǎng)容器(下圖左):  

  1)氣液界面彎液面:大部分觀察區(qū)域相差較差?! ?/span>

  2)凝膠表面的彎液面:不可能同時(shí)聚焦所有細(xì)胞?! ?/span>

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  ibidi channel μ-Slides通道載玻片  

  ibidi channel μ-Slides通道載玻片為相差顯微鏡提供了理想的光學(xué)條件。培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),通道自下而上充滿培養(yǎng)基。這在幾何上抑制了彎液面的形成,并在整個(gè)通道中實(shí)現(xiàn)了出色的相差。    

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  ibidi μ-Slides PH+  

  ibidi μ-Slides PH+(有2 Well Ph+、4 Well Ph+兩種規(guī)格)專為相差顯微鏡設(shè)計(jì)。每個(gè)孔中的特殊中間擋板可避免彎液面形成并保證出色的相差——無(wú)論孔的那個(gè)部分都能完-美-成像?!  ?/span>

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  使用μ-Slide 2 Well Ph+、4 Well Ph+可減少?gòu)澮好妫黾訉?duì)比度良好的細(xì)胞面積。這種良好的對(duì)比是由于中間擋板產(chǎn)生的平行光束路徑。  

  Ph+孔與標(biāo)準(zhǔn)孔的比較:Ph+孔無(wú)彎液面效應(yīng)    

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  ibidi μ-Dish 35 mm Quad四區(qū)塊 高壁培養(yǎng)皿  

  中心擋板提供-卓-越-的相位對(duì)比度   

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  ibidi μ-Dish 35mm Quad四區(qū)塊高壁培養(yǎng)皿(左圖)居中的中間擋板減少了彎液面的形成,從而實(shí)現(xiàn)了出色的相位對(duì)比光學(xué)。同時(shí),這種Ph+特征有利于細(xì)胞的均勻分布?! ?/span>

  就像ibidi μ-Slide 2 Well Ph+和μ-Slider 4 Well Ph+一樣,μ-Dish 35mm Quad四區(qū)塊高壁培養(yǎng)皿將出色的細(xì)胞生長(zhǎng)和出色的高分辨率顯微鏡結(jié)合在一起,無(wú)論是使用相差顯微鏡還是熒光顯微鏡。  

  訂購(gòu)信息:   

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