生物制藥實(shí)驗(yàn)中的注意事項(xiàng)和實(shí)驗(yàn)技巧分享
在生物制藥實(shí)驗(yàn)中,準(zhǔn)確和可靠地測(cè)定藥物的含量是非常重要的。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,以下是一些實(shí)驗(yàn)技巧和注意事項(xiàng):
1. 過濾溶液:當(dāng)乙醇溶解主成分后,輔料不能溶解,并需要過濾。離心方法是一種常用的過濾方法,通過離心使輔料沉淀,并取上清液。注意,在離心過程中,部分離心管沒有塞子,可以使用柔軟的塑料薄膜袋和橡皮筋代替。與薄膜過濾法相比,離心過濾法不會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生影響。此外,如果過濾操作不夠快速,乙醇易揮發(fā),可能會(huì)影響測(cè)定結(jié)果。
2. 超聲波分散:在檢驗(yàn)吲噠帕胺片的含量時(shí),使用超聲波超聲可以使片劑更易分散,可以溶解主成分,并且沒有浪費(fèi)。與研磨轉(zhuǎn)移方法相比,超聲波分散對(duì)含量均勻度測(cè)定沒有影響,且更簡(jiǎn)單方便。
3. 控制溶劑濃度:在檢測(cè)中藥材的浸出物時(shí),一定要按照標(biāo)準(zhǔn)控制好溶劑的濃度(如乙醇等),否則檢驗(yàn)結(jié)果可能會(huì)有很大的差異。
4. 對(duì)照品與供試品混合:在液相鑒別中,當(dāng)供試品與對(duì)照品出峰時(shí)間不一致時(shí),無法判斷是否合格??梢詫?duì)照品與供試品各半配成混合溶液后進(jìn)行進(jìn)樣,如果峰寬未變寬,未出現(xiàn)駝峰,則可判斷為合格。
5. 考慮理化性質(zhì)分離雜質(zhì):在進(jìn)行原料殘留物檢測(cè)時(shí),如果主藥對(duì)雜質(zhì)有干擾,現(xiàn)有方法無法檢出。在自建方法時(shí),要優(yōu)先考慮利用理化性質(zhì)將雜質(zhì)分離出來,然后再進(jìn)行測(cè)定,往往會(huì)取得意想不到的效果。
6. 生物制藥實(shí)驗(yàn)中要考慮展開劑的溫度與配制順序:在進(jìn)行藥材薄層色譜鑒別時(shí),應(yīng)該考慮展開劑的溫度與配制順序。有時(shí),這可能會(huì)對(duì)色譜的結(jié)果產(chǎn)生影響。
7. 非規(guī)定色譜柱和調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度:在進(jìn)行有機(jī)溶劑殘留量檢查時(shí),不一定要堅(jiān)持使用規(guī)定的色譜柱。通常情況下,DB-624色譜柱可以滿足要求。此外,取樣量也可以靈活調(diào)整,標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度根據(jù)限度進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整即可。
8. 飽和時(shí)間要夠:在進(jìn)行薄層色譜鑒別時(shí),飽和時(shí)間一定要夠長(zhǎng)。
9. 控制流動(dòng)相pH值:在使用HPLC測(cè)定物質(zhì)含量時(shí),如果流動(dòng)相中使用了緩沖鹽,一定要注意其pH值。因?yàn)樵诜胖眠^程中,流動(dòng)相的pH值可能會(huì)發(fā)生變化,而某些藥物對(duì)這種變化非常敏感。
10. 控制溫度:在使用HPLC測(cè)定物質(zhì)含量時(shí),溫度的控制極其重要。最好使用帶有柱溫箱的設(shè)備,如果沒有,則需在裝置中保持恒溫后再進(jìn)行測(cè)定,否則可能出現(xiàn)基線飄移,結(jié)果不準(zhǔn)確。
11. 特定品種對(duì)溫度敏感:某些藥物對(duì)溫度的影響非常大。例如,有些品種的對(duì)照品溶液不能放在冰箱中,甚至需要在液相室內(nèi)開空調(diào),并在第二天才能使用。
12. 使用微量移液槍要注意"重壓輕打":在使用微量移液槍時(shí),要注意正確施加力量,以確保加液的準(zhǔn)確性。
13. 分液加速:在進(jìn)行一些乳膏的含量測(cè)定時(shí),常使用提取分液。在分液時(shí),如果兩相的分界不清晰,可以加入少量的飽和氯化鈉溶液。這樣可以使分層更加明顯。
14. 強(qiáng)調(diào)溶解時(shí)間:呋喃唑酮溶解較慢,溶解時(shí)間一定要足夠長(zhǎng)。
15. 避免干擾峰:在使用HPLC測(cè)定物質(zhì)含量時(shí),最好使用流動(dòng)相溶解樣品。否則,容易產(chǎn)生干擾峰,影響結(jié)果。特別注意可能出現(xiàn)的倒峰情況。
16. 分層加速:在低溫環(huán)境下進(jìn)行中藥制劑的萃取時(shí),往往會(huì)出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,即兩相不容易分層。這時(shí)可以加入少量的飽和氯化鈉溶液,或者使用電吹風(fēng)對(duì)分液漏斗進(jìn)行加溫,或者用熱抹布覆蓋,可以加速分層過程。
17. 注意試劑的含水量:在非水滴定中,試劑的含水量對(duì)結(jié)果有較大影響。例如,更換不同廠家的冰醋酸,實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能會(huì)有差異。
18. 加快過濾速度:對(duì)于比較稠或量少的中藥制劑溶液,在濾紙過濾之前,可以先通過離心使其分層,然后再過濾。這樣可以加快過濾速度,減少有機(jī)溶劑的揮發(fā)(尤其是在環(huán)境溫度較高時(shí))。
19. 清洗檢測(cè)器:在使用高效液相色譜儀測(cè)定人參、麻黃的含量時(shí),由于檢測(cè)波長(zhǎng)為邊緣波長(zhǎng)(如203nm、207nm),通常一次檢測(cè)不能成功。尤其是在使用一段時(shí)間后,檢測(cè)器效果可能會(huì)下降。可以卸掉色譜柱,直接連接檢測(cè)器,使用0.1%鹽酸清洗檢測(cè)池4小時(shí),效果會(huì)有所改善。
20. 使用色譜純?cè)噭┨幚恚涸谑褂酶咝б合嗌V儀測(cè)定含量時(shí),可以使用色譜純?cè)噭┨幚韺?duì)照品和樣品,以減少誤差。
以上是一些生物制藥實(shí)驗(yàn)中的實(shí)驗(yàn)技巧和注意事項(xiàng),這些技巧和注意事項(xiàng)的應(yīng)用可以提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。正確的實(shí)驗(yàn)操作和細(xì)致的注意事項(xiàng)對(duì)于藥物研究和開發(fā)較為重要。更多實(shí)驗(yàn)室儀器、實(shí)驗(yàn)設(shè)備、實(shí)驗(yàn)耗材、實(shí)驗(yàn)試劑可以進(jìn)入蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材網(wǎng)站進(jìn)行了解。
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