ELISA技術-HRP-Streptavidin，關于辣根過氧化物酶標記原理？

昊然生物分享關于酶標記技術的相關知識點：

酶標記技術：Enzyme-linked Immunosorbent Assay，ELISA）。ELISA的原理基于免疫反應，因此它常被用于生物醫(yī)學、生物化學。

免疫標記技術是將一些既易測定又具有高度敏感性的物質標記到特異性抗原或抗體分子上，通過這些標記物的增強放大效應來顯示反應系統(tǒng)中抗原或抗體的性質與含量。

常用的標記物包括熒光素、酶和放射性核素等,用這3種標記物進行標記的免疫檢測技術被稱為3大免疫標記技術。目前,使用的免疫標記物還有化學發(fā)光物質、鐵蛋白和膠體金等。

辣根過氧化物酶(HRP)標記的原理：

辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP )

HRP廣分布于植物界，它是由無色的酶蛋白和棕色的鐵嚇啉結合而成的糖蛋白，糖含量18%。HRP由多個同功酶組成，分子量為40,000,等電點為pH3~9，酶催化的最適PH因供氫體不同而稍有差異，但多在pH5左右。酶溶于水和58%以下的硫酸銨溶液。HRP的輔基和酶蛋白最大吸收光譜分別為403nm和275nm，一般以OD403nm / OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表示酶的純度。

HRP的催化反應需要底物過氧化氫(H2O2)和供氫體(DH2)。供氫體多為無色的還原型染料，通過反應可生成有色的氧化型染料(D)。

辣根過氧化物酶標記方法

酶標記抗體的制備方法主要有兩種,即戊二醛交聯(lián)法和過碘酸鹽氧化法。

辣根過氧化物酶的標記常用過碘酸鹽氧化法,這種方法法只適用于含糖量較高的酶·過碘酸鈉將HRP分子表面的多糖氧化為醛基，醛基與抗體分子上的氨基形成Schiff堿而結合·后者可進一步用NaBH4(或乙醇胺)還原生成穩(wěn)定的酶標記抗體。

ELISA技術通常包括以下幾個步驟：

固定：在一個固定在實驗板上的表面上吸附特定的抗原或抗體，從而形成一個固定層。

洗滌：洗去未結合的分子，以減少非特異性結合。

結合：加入待測樣本（包含要檢測的分子），使待測分子與固定的抗體或抗原發(fā)生特異性結合。

洗滌：再次洗滌以去除未結合的分子。

酶標記：加入一個與待測分子特異性結合的酶標記物，如辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶（AP）。

產品名稱：HRP-Streptavidin，鏈霉親和素，HRP標記

中文名稱：

HRP標記鏈霉親和素

鏈霉親和素，HRP標記

英文名稱：

HRP-SA

HRP-Streptavidin

分類：蛋白標記

溶解性：/

規(guī)格：mg

純度：95%+

儲存：/

用途：科研

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