為了保證人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定及順利完成,廣大科研者和經(jīng)銷商首先要考慮的就是產(chǎn)品的選擇,一定要選用質(zhì)量靠得住的產(chǎn)品。其實(shí),我們?cè)谑褂肊LISA試劑盒時(shí),對(duì)自身以及對(duì)產(chǎn)品的要求都是很嚴(yán)格的;下面就為大家提供幾點(diǎn)參考
1.抗體類型
單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELNSA,實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合效果更好。例如。對(duì)于雙抗夾心法而言,用多抗進(jìn)行捕挾而單抗進(jìn)行檢測(cè)有時(shí)更有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原,隨后單抗再特異性檢測(cè)擁有特定抗原表位的抗原。
雙抗夾心法BISA中捕獲抗體與檢測(cè)抗體〈不論多抗還是單抗)的周對(duì)很有講究。我們不希望輔獲抗體與檢測(cè)抗體競(jìng)爭(zhēng)抗原上的同一位點(diǎn),為此我們就需要確保捕獲抗體和檢測(cè)抗體所識(shí)別的抗原表位不存在重疊。如果捕獲抗體和檢測(cè)抗體之間發(fā)生了沖突,就會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生較大影響。要蔽免這一問(wèn)題,我i們門可以選擇購(gòu)買“matched pair”的捕獲/檢測(cè)則抗體對(duì),這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過(guò)驗(yàn)證才推薦的好組合。
2.交叉反應(yīng)
如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)就會(huì)影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的特異性。其中抗體來(lái)源所帶來(lái)的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個(gè)因素。盡管現(xiàn)在購(gòu)買源自動(dòng)物的抗體越來(lái)越容易,我們?nèi)杂斜匾_認(rèn)一下是否會(huì)產(chǎn)生交叉反應(yīng)的問(wèn)題。在用雙抗夾心法進(jìn)行LISA檢狽時(shí),檢測(cè)用的二抗必須特異性針對(duì)檢測(cè)一抗。而不能與捕獲抗體起反應(yīng)·如果檢則用二抗與捕獲抗體結(jié)合,實(shí)驗(yàn)特異性就會(huì)大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測(cè)一抗,來(lái)避免上述問(wèn)題。
3.檢測(cè)方式
如今檢測(cè)BLISx有許多途徑,我們可以根據(jù)自己人EITSA式試就險(xiǎn)的偏好進(jìn)行選擇。—般ELISA檢則的是酶促足反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物,抗體上結(jié)合有相應(yīng)的癇(例伽如通常使用的辣根過(guò)氧化物酶JBP〉,而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物《如3,3-二氨基聯(lián)苯胺DNB〉。這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色??梢酝ㄟ^(guò)分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)。堿性硝酌酶-R也是一種常用酶。酶可以結(jié)合在一抗上,也可以結(jié)合在二抗上,還可以使用鏈雷親和素標(biāo)記的醇與親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合。此外BLISk的結(jié)果檢測(cè)還包括放射性檢測(cè)、熒光檢測(cè)、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測(cè)等。
上海通蔚一直致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供科研試劑和完善的人ELISA試劑盒技術(shù)服務(wù),滿足生物化學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生物科技實(shí)驗(yàn)需求。
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