HA31016 磁珠法24孔質(zhì)粒DNA小量抽提試劑盒（90-96mL）

可應(yīng)用于對小量菌液進(jìn)行質(zhì)粒DNA抽提。試劑盒采用高性能納米磁珠和特殊緩沖液系統(tǒng)。磁珠在一定條件下對質(zhì)粒DNA具有極(空格)強(qiáng)的親和力，當(dāng)條件改變時(shí)可以可逆的釋放質(zhì)粒DNA，從而達(dá)到分離純化質(zhì)粒DNA的效果。整個(gè)操作過程簡便、快速。本產(chǎn)品可最大限度的去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，保證提取所得質(zhì)粒DNA的純度，所得質(zhì)粒DNA產(chǎn)物可直接應(yīng)用于酶切、測序、文庫篩選、連接和轉(zhuǎn)化等各種下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒可在EP管中進(jìn)行手動法操作，或者與自動化核酸提取儀配合使用實(shí)現(xiàn)自動化高通量操作。

【試劑盒組成】

【貯存條件】

組分①-⑥于2～8℃保存；組分⑦于-20℃保存；其他組分室溫保存；

【實(shí)驗(yàn)步驟】

一、試劑準(zhǔn)備

1. 將組分⑦RNase A酶溶液取出1.6uL加入組分①P1 buffer中，混勻，放置4℃保存?zhèn)溆茫?/p>

2. 在組分⑤Binding buffer中加入9.75mL無水乙醇，混勻，室溫保存?zhèn)溆茫?/p>

3. 在組分⑥Wash buffer中加入40mL無水乙醇，混勻，室溫保存?zhèn)溆谩?/p>

二、操作步驟

1.  樣品準(zhǔn)備

a) 在24深孔板里過夜培養(yǎng)的4mL菌液，在離心機(jī)的水平轉(zhuǎn)子上4000rpm離心15min，盡棄上清。

注意：孔之間不要污染。

b) 將300μL P1 Buffer加入24深孔板離心過后的菌體中，將24深孔板放置實(shí)驗(yàn)桌上，貼著桌面左右晃動，菌體充分懸浮。

注意：使用前請?zhí)砑覴Nase 到P1 Buffer和在懸浮菌體時(shí)液體不要濺出杜絕污染。

c)  加300μL P2 Buffer到已懸浮好的菌液中，左右緩慢搖動混合均勻（不能劇烈震蕩），進(jìn)行裂解。

注意：操作時(shí)間不能超過5min（防止基因組污染）。

d) 再向裂解體系中加入420μL P3 Buffer，左右緩慢搖動混合均勻（不能劇烈震蕩），出現(xiàn)絮狀物沉淀。

e) 將裂解后的24深孔板放置在離心機(jī)的水平轉(zhuǎn)子上4000rpm離心20min。

f) 取出離心后的24深孔板，一一對應(yīng)的轉(zhuǎn)移840uL上清至24 深孔板中。

注意：在轉(zhuǎn)移過程中杜絕出現(xiàn)污染，樣品并做好標(biāo)記。

2. 質(zhì)粒抽提

a) 準(zhǔn)備清洗24孔深孔板，添加2 mL的Washbuffer(已添加乙醇)至新的24孔深孔板。

b) 準(zhǔn)備洗脫24孔深孔板，添加100uL的無菌水至新的24孔深孔板。

c) 添加200uL磁珠混懸液至上述24深孔板中，完成后再加入1040uL的Binding buffer(已添加乙醇)至24孔深孔板中。

注意：添加磁珠前混勻磁珠混懸液。

d) 放置24孔磁力套至1號板位的24孔深孔板上，2號板位放置含有樣品和磁珠24孔深孔板，3號和4號板位放置含有Wash buffer的24孔深孔板，5號板位放置100uL的超純水的24孔深孔板。

e) 運(yùn)行質(zhì)粒抽提儀器，進(jìn)入質(zhì)粒抽提專用程序，運(yùn)行完成后用移液器將樣品轉(zhuǎn)移至全裙邊的96PCR板里，轉(zhuǎn)移完成后標(biāo)記項(xiàng)目號和質(zhì)粒信息。

f) 使用分光光度計(jì)檢測A260，并進(jìn)行定量，測定的濃度記錄于96PCR板上并登記excel表。

【注意事項(xiàng)】

1.  試劑時(shí)間長可能會出現(xiàn)沉淀，使用前輕輕搖晃混合均勻。也可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

2.  磁珠使用前充分搖勻。RNase保存在-20℃。試劑盒其他成分置于常溫保存。

3.  Buffer P1加入后一定要充分懸浮細(xì)菌，要保證看不到結(jié)塊的菌，否則細(xì)菌不易被裂解，質(zhì)粒產(chǎn)量會顯著下降。

4.  Buffer P2是否有沉淀。如有沉淀可用水浴（37℃）加熱溶解，混勻后使用。

5.  基因組污染：Buffer P2和P3加入后輕輕搖晃，防止基因組斷裂。