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細胞培養(yǎng)板使用過程中容易被忽視的“邊緣效應”

來源:東地(北京)科技有限公司   2023年12月08日 10:40  

邊緣效應(Edge Effect)是指在利用96孔(或更多)培養(yǎng)板進行細胞培養(yǎng)時,處在周邊及四個角孔中的細胞通常會表現(xiàn)出異常的現(xiàn)象。

產(chǎn)生邊緣效應的原因

1. 溫度:聚苯乙烯本身為不良熱導體,將板從室溫(25℃左右)置于37℃的溫箱,隨著孔板升溫,在外周孔與中心孔之間可能存在熱力學梯度。

2. 蒸發(fā):在培養(yǎng)箱經(jīng)常開關的情況下,由于位置效應,邊緣孔的濕度較中間孔更低,水分揮發(fā)的現(xiàn)象就更為嚴重。容易造成四周培養(yǎng)基的體積會明顯少于中間孔,而四個角落則更甚。對于長時間周期的研究來說,這是一個不容忽視的問題——隨著培養(yǎng)基的蒸發(fā),孔內(nèi)的培養(yǎng)基成分和藥物濃度將增加,這可能導致孔內(nèi)沉淀的出現(xiàn)。孔與孔之間的營養(yǎng)物濃度、pH值也會影響基因和蛋白質(zhì)的表達,以及最終的細胞生長發(fā)生變化。隨之而來的Western、PCR/qPCR、ELISA和其他應用也就越不一致。

不推薦的應對辦法

1. 留空:許多研究人員會通過避免使用邊緣孔來提高數(shù)據(jù)可重復性,比如使用96孔板,外圍的36個孔將被棄用(板的37.5%被浪費)。因此,實驗組須分布在多塊培養(yǎng)板上以達到足夠的通量,增加了工作量和成本,同時也降低了實驗中培養(yǎng)板布局的靈活性。

2. 填充:PBS溶液、水或培養(yǎng)基填充外孔將有助于板的水合,限制蒸發(fā),但這可能會成為細菌的滋生地。

3. 平鋪:當堆疊起來的時候,處于頂部和底部的孔板將比中間的更快達到37℃,造成溫度梯度。但大多數(shù)培養(yǎng)箱被不止一個研究人員使用且空間有限,如果其他人選擇堆放,仍然會阻礙空氣流向你的樣品,影響溫度。

防止邊緣效應的建議

1. 盡量縮短試驗周期,從而減少液體在孔中儲存的時間,減少蒸發(fā)。

2. 使用低蒸發(fā)蓋帶冷凝環(huán)的蓋子。

3. 使用透明或鋁箔密封膠帶進行生化測定,或使用透氣的無菌膠帶進行細胞測定。

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