柱前衍生及柱后衍生法

來源：北京中檢維康生物技術(shù)有限公司 2024年01月04日 10:03

關(guān)于檢測方法?

GB 5009.240-2023 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中伏馬菌素的測定（將于2024年3月實(shí)施）

LS/T 6130-2017 糧油檢驗(yàn) 糧食中伏馬毒素B1、B2的測定超高效液相色譜法

IAC-107伏馬毒素免疫親和柱能夠特異性的純化與濃縮樣品中的伏馬毒素B1 、B2 、B3 . 伏馬毒素免疫親和柱廣泛地應(yīng)用于糧食、食品、飼料、等樣品的提取，該方法速度快、操作簡單、準(zhǔn)確性高，對準(zhǔn)確靈敏的測定樣品中的伏馬毒素起到重要的作用。

? 操作流程?

一、樣品前處理

1.樣品提取及稀釋

1.1 稱取25.0g(精確到0.1g)過篩樣品于均質(zhì)杯中,加入乙腈水(5+5) 100mL，以均質(zhì)器高速攪拌提取2min或振蕩提取20min,定量濾紙過濾。

1.2 移取2.0mI濾液加入48mL0.1%的吐溫/PBS稀釋混勻。

2.樣品凈化

2.1將免疫親和柱連接于玻璃注射器下準(zhǔn)確移取50.0mL上述樣品溶液注入玻璃注射器中。

2.2將空氣壓力泵與玻璃注射器連接,調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/s的流速緩慢通過免疫親和柱,直至空氣進(jìn)入親和柱中。

2.3用10mL水淋洗親和柱流速為1滴/s~2滴/s.直至空氣進(jìn)入親和柱中,棄去全部流出液，抽干小柱。

2.4準(zhǔn)確加入3mL甲醇-乙酸溶液( 98+2 洗脫流速約為1滴/s,收集洗脫液。50°C下氮?dú)鉂饪s吹干后，用乙腈水 (5+5) 定容至1 mL，待檢測。

二、液相條件及衍生方法

柱前衍生法

色譜柱: Cloversil-C18 4.6*150mm (5um) 或4.6*250mm (5um)

流動(dòng)相: 甲醇:0.1MNaH2PO4(77: 23 體積比)用磷酸將PH值調(diào)到3.3

檢測器: 激發(fā)波長335nm 發(fā)射波長440nm

進(jìn)樣體積: 20uL

衍生方法：取100uL標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品凈化液于進(jìn)樣瓶中加入100uL OPA衍生試劑A渦旋混合30s，在 2分鐘內(nèi)進(jìn)樣分析。

柱后衍生法

色譜柱: Cloversil-C18 4.6*150mm (5um) 或4.6*250mm (5um)

流動(dòng)相: 甲醇/(65+35)

檢測器:激發(fā)波長335nm發(fā)射波長440mm

進(jìn)樣體積: 20uL

衍生泵流速: 0.4mL/min

衍生溫度: 50℃

衍生泵流動(dòng)相: OPA行生試劑B

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