細(xì)胞培養(yǎng)/細(xì)胞實驗操作步驟

一、細(xì)胞培養(yǎng)時的注意事項：

       1、確定所有的細(xì)胞操作用的溶液和耗材都已經(jīng)消毒并檢測沒有問題，不確定的溶液和耗材請勿使用，除非特殊情況，不要借

用別人的溶液。

       2、確定衣服的袖口已經(jīng)卷起或者白大褂的袖口已經(jīng)扎緊。

       3、確定酒精燈內(nèi)的酒精量，需要的話及時進(jìn)行補(bǔ)充。

       4、確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。為了方便單手開啟瓶蓋，實驗開始前可以把所有瓶蓋旋松。

       5、盡量不要直接傾倒溶液，除非瓶口沒有被燒壞。如果傾倒失敗，溶液粘在瓶口，請用噴過75%酒精的紙巾仔細(xì)清潔瓶口

周圍（不要接觸到瓶口）后在火焰上簡單燒灼。

       6、操作時如果不能肯定所用的耗材是潔凈的，必須及時更換。

       7、實驗完畢及時收拾，保持工作區(qū)域清潔整齊，最后用75%酒精清潔臺面。

二、細(xì)胞污染的預(yù)防

       1、實驗用品防止污染。細(xì)胞培養(yǎng)所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒。各種溶液滅菌要仔細(xì)，并在無菌實驗檢測陰性后才能

使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。

       2、操作過程防止污染。

       3、穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂后才能進(jìn)入細(xì)胞間。

       4、實驗開始前需要確定戴的手套沒有問題，只要接觸過生物安全柜之外的物品，必須及時對手套進(jìn)行消毒。

       5、進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)間后關(guān)好門，坐下來盡量少走動以免影響生物安全柜的風(fēng)簾。工作開始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。

事先要嚴(yán)格檢查所用的器材、溶液和細(xì)胞，不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無菌室內(nèi)，更不能隨便使用，以免造成大規(guī)模污染。

       6、細(xì)胞操作時動作要輕，必須在火焰周圍無菌區(qū)內(nèi)打開瓶口，并將瓶口放在火焰周圍簡單轉(zhuǎn)動燒灼，注意不要讓火焰把塑料

瓶口燒化。

       7、實驗操作時生物安全柜的隔板要盡可能放低，盡量減少談話，打噴嚏或咳嗽時絕對不能對著工作區(qū)，以免造成不必要的

污染。

       8、瓶蓋應(yīng)當(dāng)?shù)狗旁谶h(yuǎn)離自己的地方，以避免瓶蓋被誤操作所污染。

       9、不要從敞開的容器口上方經(jīng)過，以避免衣服上掉落不明物體對細(xì)胞的污染。

       10、實驗操作時要注意及時更換巴斯德吸管、移液槍槍頭和移液管，切勿一根管子做到底。一旦發(fā)現(xiàn)接觸了非潔凈或者無法

確定潔凈的物品必須直接丟棄。實驗完畢應(yīng)及時收拾，保持實驗室清潔整齊，最后用75%酒精清潔臺面。

三、防止細(xì)胞交叉污染

       1、在進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時，所用器具要嚴(yán)格區(qū)分，最好作上標(biāo)記便于辨別。按順序進(jìn)行操作，一次只處理一種細(xì)胞，

多種細(xì)胞多種操作一起進(jìn)行時易發(fā)生混亂。

       2、在進(jìn)行換液或傳代操作時，粘有細(xì)胞的移液槍頭和移液管不要觸及試劑瓶瓶口，以免把細(xì)胞帶到培養(yǎng)基中污染其他細(xì)胞。

       3、所有細(xì)胞一旦購置，或從別處引入，或自己建立，必須及時保種凍存，一旦發(fā)生污染可重新復(fù)蘇細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)。