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免疫組化實(shí)驗(yàn)常見問題分析

來源:上海喆圖科學(xué)儀器有限公司   2024年03月27日 17:02  
1. IHC實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯色過深
一抗?jié)舛冗^高或孵育時(shí)間過長——降低一抗?jié)舛然驕p少孵育時(shí)間
孵育溫度過高——選擇4℃或室溫孵育

2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在非特異性顯色
石蠟切片脫蠟——延長脫蠟時(shí)間
蛋白封閉不充分——增加蛋白封閉時(shí)間
組織富含內(nèi)源性生物素與過氧化物酶——使用相關(guān)試劑進(jìn)行封閉

3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯色弱或無染色
一抗?jié)舛冗^低或孵育時(shí)間過短——增加一抗?jié)舛然蜓娱L孵育時(shí)間
組織中無目的抗原的表達(dá)
一抗種屬來源與二抗不匹配

注意事項(xiàng)
切片脫蠟和水化要充分,加反應(yīng)液時(shí)要覆蓋組織充分;每次加液前甩干洗滌液,同時(shí)防止干片。
一抗的沖洗原則:單獨(dú)沖洗,防交叉反應(yīng)污染;溫柔沖洗,防止切片脫落;推薦浸洗方式。
有條件的話最好立即拍照,若不能及時(shí)拍照,也要封好片和用指甲油封固,保持避光和濕度。


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