1

根據(jù)實驗選擇合適大小的爬片。

2

爬片處理，首先浸酸：5%稀鹽酸浸泡過夜（最好逐片浸入，多片同時浸入會引起多片粘連、浸洗不充分），第二天先用自來水沖洗20次，再用三蒸水沖洗2次（清除殘留酸液）。

3

將爬片置于無水乙醇浸泡過夜（浸洗脂類污漬），75%乙醇長期保存?zhèn)溆?span style="margin: 0px; padding: 0px; outline: 0px; max-width: 100%; box-sizing: border-box !important; overflow-wrap: break-word !important; color: rgba(78, 77, 77, 0.69);">（無需高壓滅菌）。使用時鑷子取出爬片，酒精燈烘烤，放入孔板。

1

收集貼壁細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，按照實驗需求用完-全培養(yǎng)基稀釋細(xì)胞至合適濃度。

2

加細(xì)胞前，先在每個孔里準(zhǔn)備放爬片的位置滴加少量培養(yǎng)基（目的是使爬片與培養(yǎng)皿靠液體的張力粘合到一起），然后輕放爬片（注意不要產(chǎn)生氣泡，防止加細(xì)胞懸液時爬片漂起）。整個過程注意無菌操作。

3

根據(jù)實驗需求接種合適細(xì)胞量到培養(yǎng)器皿內(nèi)。

固定液的選擇：

以多聚甲醛為例進(jìn)行固定：

1

準(zhǔn)備4%多聚甲醛（PFA），于4℃冰箱中保存，使用時常溫復(fù)溫。

2

在培養(yǎng)板中將已爬好細(xì)胞的爬片用PBS浸洗3次，每次3 min，輕輕晃動，避免將細(xì)胞沖掉。

3

用4%的多聚甲醛固定爬片15 min（細(xì)胞自帶熒光時注意避光），PBS浸洗爬片3次，每次3 min。

4

Triton X-100（PBS配制，濃度根據(jù)實驗調(diào)整）室溫通透20 min。

5

PBS浸洗爬片3次，每次3 min。

6

按實驗需求進(jìn)行后續(xù)實驗。

注意事項