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極速揭秘 | 10分鐘內(nèi)完成UV-Vis熱解鏈實驗

來源:安捷倫科技(中國)有限公司   2024年04月25日 15:30  

寡核苷酸的熱解鏈實驗是一項重要的確認測試,用于分析雙鏈結(jié)構(gòu)的熱穩(wěn)定性,也是 PCR 反應(yīng)退火溫度的重要參考依據(jù)。


該實驗可以通過紫外可見分光光度計實現(xiàn)。通常的測試方法為測定核酸類藥物在 260nm 處的吸光度值隨溫度變化的曲線。隨著溫度的升高,雙鏈結(jié)構(gòu)逐漸打開,260nm 處的吸光度值逐漸升高,直至打開成單鏈后吸光度值保持穩(wěn)定,當雙鏈結(jié)構(gòu)失去一半時所對應(yīng)的溫度定義為解鏈溫度(Tm 值)。


在此實驗中,最重要的是要控制溫度的變化,傳統(tǒng)的紫外分光光度計需要使用復(fù)雜的附件來控制溫度,例如,水控溫系統(tǒng)需要插額外的管線并進行換水和清潔的工作。同時,測試耗時長,至少需要 1 個小時以上才能完成。


借助 Cary3500 UV-Vis 紫外可見分光光度計可在 10 分鐘內(nèi)完成解鏈溫度的分析。


Cary3500 UV-Vis 紫外可見分光光度計采用帕爾貼風冷控溫系統(tǒng),升溫降溫全程電子控溫,無需額外管線。搭配溫度探頭觸達溶液,精準實現(xiàn)溶液內(nèi)的溫度控制,同時,攪拌子可使每個樣品的溫度保持均勻,這樣就可以設(shè)置更快的升溫速率,縮短分析時間,且不會降低數(shù)據(jù)質(zhì)量。


Cary3500 UV-Vis 最快可設(shè)置 40℃/min 的升溫速率,經(jīng)過驗證,不同的升溫速率下得到的 Tm 值的波動小于 0.4℃。


極速揭秘 | 10分鐘內(nèi)完成UV-Vis熱解鏈實驗

圖 1. 鯡魚精子 DNA 吸光度與溫度 (A) 和相應(yīng)的一階導數(shù) (B) 作為升溫速率的函數(shù)

另外,Cary3500UV-Vis 多池控溫的選項,可以以快速升溫實現(xiàn) 4 個樣品的同時測試和慢速升溫實現(xiàn) 7 個樣品的同時測試。


下面,我們通過視頻來查看下 Cary3500 是如何實現(xiàn)熱解鏈溫度的測試的。



當然,Cary3500UV-Vis 的操作軟件也可以與 Agilent OpenLab 軟件集成。OpenLab 提供技術(shù)控制來安全地獲取、處理報告和存儲數(shù)據(jù)。對于必須遵循 FDA 21 CFR Part 11,歐盟附錄 11,GAMP5 以及 ISO/IEC 17025 和 EPA 40 CFR Part 160 合規(guī)指南的實驗室來說,這些控制是不可少的。




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