細(xì)胞計(jì)數(shù)儀對于做動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的老師而言，可以算是簡單又常用的分析儀器之一了。但看似簡單的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，也可能讓使用者為之抓狂。

曾收到一位做工藝開發(fā)的老師反饋，他使用的一款細(xì)胞計(jì)數(shù)儀三次檢測同一個(gè)樣品，每次分析結(jié)果和平均值的偏差都超出正?？山邮芊秶?/span>
這么簡單的儀器為何會出現(xiàn)這種問題

是否是儀器本身的性能問題

如果您手頭已有細(xì)胞計(jì)數(shù)儀在使用，如何來判定這款細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的重復(fù)性和準(zhǔn)確性呢？

根據(jù)《定量細(xì)胞計(jì)數(shù)方法性能的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和統(tǒng)計(jì)分析（ISO20391-2:2019）》一文中，關(guān)于細(xì)胞計(jì)數(shù)方法性能判定的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，建議至少做4個(gè)濃度梯度，每個(gè)濃度梯度至少做3次重復(fù)性測試。我們可以考慮使用該方法來評判手上細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的性能好壞，具體的細(xì)胞選擇和樣品制備上可以參考ISO20391-2:2019里面的具體描述。

在此，我們拿Vi-CELL BLU全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀和另一款半自動(dòng)插板式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀分別進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的重復(fù)性和準(zhǔn)確性的性能評估。

這里檢測用到的是一種腫瘤細(xì)胞，按4個(gè)濃度梯度稀釋（原液，2倍，5倍和10倍稀釋），并且每個(gè)濃度做3組重復(fù)性檢測，以下是測試得到的結(jié)果和統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。

針對同一個(gè)樣品的4個(gè)不同稀釋倍數(shù)和3組重復(fù)性檢測，同時(shí)使用半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（通常需要使用細(xì)胞計(jì)數(shù)板作為載體，同時(shí)臺盼藍(lán)染色需要手動(dòng)完成）檢測是怎樣的效果呢？如下表所示是一款半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀上檢測得到的數(shù)據(jù)。

由于半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀裝機(jī)后很久未做過標(biāo)樣的驗(yàn)證和校準(zhǔn)，所以和全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的測試結(jié)果之間的差異在此不做比較分析。

為了能比較得出這兩臺細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的重復(fù)性和準(zhǔn)確性的性能水平，我們將每臺儀器3次原液檢測（編號：S3-原液）得到的活細(xì)胞密度平均值作為“真值”。那么Vi-CELL BLU得到的“真值”是3.44M，而半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀得到的“真值”是3.06M。而其他3個(gè)稀釋倍數(shù)下計(jì)算得到的平均結(jié)果，都分別和這個(gè)“真值”進(jìn)行比較，并且計(jì)算得到相對偏差。

通過分析我們可以看到隨著S3樣品的稀釋倍數(shù)不斷增加，Vi-CELL BLU的活細(xì)胞密度平均值偏差也逐漸變大，但都在±10%的偏差范圍內(nèi)。同時(shí)每個(gè)稀釋倍數(shù)下的3次重復(fù)性檢測RSD都小于5%，顯示出良好的測試結(jié)果重復(fù)性。

而半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀對5倍和10倍稀釋的樣品檢測，3次測試結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差已經(jīng)大于10%，并且稀釋10倍的活細(xì)胞密度平均值和原液“真值”結(jié)果比較，偏差達(dá)到了15.03%。所以，半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的重復(fù)性檢測上相對要差很多，并且隨著稀釋倍數(shù)增加，檢測得到的結(jié)果和原液結(jié)果之間的偏差加大。

通過以上這種性能檢測方法，我們可以得出無論是在3次測試的重復(fù)性，還是梯度稀釋結(jié)果的準(zhǔn)確性，Vi-CELL BLU全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀都比半自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀更有優(yōu)勢。如果您對自己使用的細(xì)胞計(jì)數(shù)儀性能感興趣，也可以嘗試用這個(gè)方法來檢測判斷。

至于為何Vi-CELL BLU全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀在重復(fù)性檢測和梯度稀釋的測試準(zhǔn)確性上，都比半自動(dòng)插片式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀更有優(yōu)勢？下一期的內(nèi)容，我們將針對這個(gè)問題為您做具體的介紹。