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大鼠組胺（Histamine）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書
大鼠組胺（Histamine）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
本試劑盒用于體外定量檢測大鼠血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中組胺（Histamine）的含量。
使用目的
本試劑盒用于體外定量檢測大鼠血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中組胺（Histamine）的含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠組胺（Histamine）水平。用純化的大鼠組胺（Histamine）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入組胺（Histamine），再與HRP標(biāo)記的組胺（Histamine）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的組胺（Histamine）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠組胺（Histamine）濃度。
注意事項(xiàng)
1. 本試劑盒僅用于科研，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。
2. 使用試劑盒前，請仔細(xì)閱讀說明書，以試劑盒內(nèi)的說明書為準(zhǔn)，請務(wù)必理解說明書內(nèi)容。
3. 酶標(biāo)包被板屬于可拆型，開封后如未用完，板條應(yīng)裝入鋁箔袋密封并2-8°C保存。
4. 加樣樣本和試劑應(yīng)盡快完成。
5. 為了讓測試結(jié)果更準(zhǔn)確，盡可能混勻酶標(biāo)板孔中所加試劑，酶標(biāo)板不能反復(fù)使用。
6. 避免實(shí)驗(yàn)過程中酶標(biāo)板干燥；清洗后盡快加試劑。
7. 實(shí)驗(yàn)開始，所有試劑應(yīng)平衡到室溫 （21-26°C） 后方可進(jìn)行。溫度會影響吸光度值，但不影響樣本值。
8. 切忌用口加樣，以免試劑和樣本粘到皮膚和粘膜上。
9. 不要在處理樣本或試劑的區(qū)域抽煙、吃東西、喝酒或化妝。
10. 操作時(shí)帶一次性手套，微生物的污染會影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的正確性。
11. 操作應(yīng)按照國家規(guī)定的安全條列進(jìn)行。
12. 過期的試劑盒切勿再使用。
13. TMB 底物對皮膚有刺激性，不慎入眼，立即用大量水沖洗，皮膚上不慎接觸到也應(yīng)立即用肥皂，并用大量的水沖洗。試驗(yàn)中被污染的物品在下次使用前應(yīng)盡快清洗。
14. 配置的化學(xué)品或使用后的試劑，根據(jù)國家微生物安全條列都視為危險(xiǎn)廢物。
試劑盒組成
| 說明書 | 1 | |
| | 2 | |
| 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 2-8℃ |
| 標(biāo)準(zhǔn) | 0.5ml×1 瓶 0 ng/ml 0.5ml×1瓶 0.3 ng/ml 0.5ml×1瓶 0.6 ng/ml 0.5ml×1瓶 1.2 ng/ml 0.5ml×1瓶 2.4 ng/ml 0.5ml×1瓶 4.8 ng/ml | 2-8℃ |
| 生物素標(biāo)記的抗Histamine抗體 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 顯色劑B液 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 終止液 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1瓶 | 2-8℃ |
| 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 2-8℃ |
需要而未提供的試劑和器材
1. 吸光度值在450nm波長下檢測的酶標(biāo)儀。
2. 1-2ml的加樣器。
3. 100 ml和1L的量筒。
4. 吸水紙。
5. 37°C恒溫箱。
6. 蒸餾水或去離子水。
7. 數(shù)據(jù)分析和繪圖軟件，圖紙。
8. 標(biāo)準(zhǔn)和樣品稀釋的試管。
儲存條件
1. 有效期內(nèi)的試劑如開封后未用完，請2-8°C 保存。
2. 過期的試劑請不要用，打開后的試劑2-8°C 保存。
3. 酶標(biāo)包被板必須2-8°C 保存，如有未用完的酶標(biāo)包被板，打開的鋁箔袋須密封并2-8°C 保存。
4. 開封后的試劑盒2-8°C只能保存8周。
試劑準(zhǔn)備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。
樣本處理及要求
血清-用采血管收集血液，室溫血液自然凝固30分鐘，1000 xg離心15分鐘左右，收集上清，盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，或者分裝后-20°C或 -80°C 保存。
血漿-收集好的血漿根據(jù)要求選擇EDTA或者肝素作為抗凝劑，2-8°C 1000 xg離心15分鐘左右，30分鐘內(nèi)收集好，-20°C或 -80°C 保存，避免反復(fù)凍融。
細(xì)胞上清及相關(guān)液體-收集好的樣本離心后應(yīng)盡快實(shí)驗(yàn)，或者分裝后-20°C或 -80°C 保存，避免反復(fù)凍融。
注意事項(xiàng)
1. 所有試劑和樣本使用前必須在室溫下平衡，混勻試劑時(shí)不應(yīng)起泡沫。
2. 一旦實(shí)驗(yàn)開始，各操作步驟都應(yīng)盡快完成。
3. 避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管，以免交叉污染。
4. 一般情況，酶的反應(yīng)與時(shí)間和溫度成正比。
操作步驟
1. 加標(biāo)準(zhǔn)品：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔，依次加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50ul（建議每個(gè)濃度做2個(gè)平行孔）。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品、生物素標(biāo)記的抗Histamine抗體及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品40μl，然后再加生物素標(biāo)記的抗Histamine抗體10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行
實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，即為樣品的實(shí)際濃度。
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