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細(xì)胞電轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)的主要影響因素有哪些？
1、細(xì)胞密度對(duì)電轉(zhuǎn)的影響
細(xì)胞系電轉(zhuǎn)的細(xì)胞密度最好在0.5M-2.0M/20ul，或2.5M-10M/100ul. 常用1M/20ul. PBMC直徑更小，細(xì)胞密度一般為1M-5M/20ul, 或5M-25M/100ul。細(xì)胞密度越高可以增加細(xì)胞間電流輔助，從而增加細(xì)胞的有效電轉(zhuǎn)面積。密度高時(shí)電壓需要稍微調(diào)高一些，所以電轉(zhuǎn)時(shí)細(xì)胞密度根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選定后盡量不要變化。
需要特別注意的地方：一個(gè)樣品加進(jìn)電擊管后，不要等候，馬上進(jìn)行電轉(zhuǎn)，完成后再處理下一個(gè)樣品，不要把一批樣品全部加樣完成后再一起電轉(zhuǎn)。等候時(shí)間過長，細(xì)胞沉降也會(huì)導(dǎo)致電擊管內(nèi)上下細(xì)胞密度不均勻而降低電轉(zhuǎn)效率。電轉(zhuǎn)完成后細(xì)胞可以馬上取出培養(yǎng)，也可以等全部樣品處理完畢再取出培養(yǎng)。
2、細(xì)胞聚團(tuán)對(duì)電轉(zhuǎn)的影響
當(dāng)細(xì)胞聚團(tuán)時(shí)，其中只有一側(cè)細(xì)胞可以被電轉(zhuǎn)，中間和另一側(cè)細(xì)胞不能被電轉(zhuǎn)，降低電轉(zhuǎn)效率。所以消化細(xì)胞過程中注意細(xì)胞不要成團(tuán)。
3、溫度對(duì)電轉(zhuǎn)的影響
溫度對(duì)電轉(zhuǎn)影響也很大。一般室溫（23度）適宜進(jìn)行電轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)。溫度越低，需要電壓越高。4度電轉(zhuǎn)比室溫23度電轉(zhuǎn)大概需要增加3%到5%的電壓。所以為保證電轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可重復(fù)性，需要將每次的電轉(zhuǎn)溫度保持一致。
4、DNA質(zhì)量對(duì)電轉(zhuǎn)的影響
DNA越純凈，越有利于電轉(zhuǎn)。DNA中雜質(zhì)較多時(shí)，細(xì)胞毒性大，非常不利于電轉(zhuǎn)。市場(chǎng)上在售的品牌質(zhì)粒提取試劑盒一般都可以。DNA加得比較多時(shí)，電轉(zhuǎn)效率呈線性遞增。但是電轉(zhuǎn)時(shí)DNA加的過高也會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性，電壓需要稍微下調(diào)。所以DNA濃度應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要相應(yīng)調(diào)整，濃度范圍一般在10ug/ml-200ug/ml。
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